兽医实验室考试
试述炭疽病的微生物学诊断方法。
题目
试述炭疽病的微生物学诊断方法。
参考答案和解析
正确答案:
疑似炭疽死亡动物的尸体，应尽快自末梢血管（耳尖、尾尖等）采血，涂片染色镜检，取血后应立即用烙铁将创口烙焦，以止血封口。由于病尸体内的炭疽杆菌暴露于空气中，接触了氧，气温又不适宜其生长时，就会形成芽孢，所以尸体严禁剖检。
（1）涂片镜检 取标本涂片进行革兰氏染色，发现有荚膜的呈竹节状排列的革兰氏阳性大杆菌，结合临床症状可作出初步诊断。陈旧病料可以看到“菌影”，确诊须做分离培养和动物接种。
（2）分离培养 取病料接种普通琼脂或血液琼脂，37℃培养18-24h，观察有无典型的炭疽杆菌菌落，同时革兰氏染色镜检。
（3）动物试验 将待检材料或培养物用生理盐水做适当稀释和磨匀后，皮下注射小鼠0、1-0、2ml,如为炭疽，多在18-24h因败血病死亡。剖检可见注射部位皮下胶样水肿，脾脏肿大。取脏器涂片镜检，如发现有荚膜竹节状大杆菌，可确诊。
（4）血清学试验 常用炭疽环状沉淀试验（Ascoli氏反应）。方法是：在一支小玻璃管内把疑为炭疽病死亡动物尸体组织的浸出液与特异性炭疽沉淀素血清重叠，若二液接触面产生灰白色沉淀环，即可诊断。
（1）涂片镜检 取标本涂片进行革兰氏染色，发现有荚膜的呈竹节状排列的革兰氏阳性大杆菌，结合临床症状可作出初步诊断。陈旧病料可以看到“菌影”，确诊须做分离培养和动物接种。
（2）分离培养 取病料接种普通琼脂或血液琼脂，37℃培养18-24h，观察有无典型的炭疽杆菌菌落，同时革兰氏染色镜检。
（3）动物试验 将待检材料或培养物用生理盐水做适当稀释和磨匀后，皮下注射小鼠0、1-0、2ml,如为炭疽，多在18-24h因败血病死亡。剖检可见注射部位皮下胶样水肿，脾脏肿大。取脏器涂片镜检，如发现有荚膜竹节状大杆菌，可确诊。
（4）血清学试验 常用炭疽环状沉淀试验（Ascoli氏反应）。方法是：在一支小玻璃管内把疑为炭疽病死亡动物尸体组织的浸出液与特异性炭疽沉淀素血清重叠，若二液接触面产生灰白色沉淀环，即可诊断。
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相似问题和答案
第1题：
试述乳糜尿的诊断方法及治疗方法。
本题答案：诊断方法：(1)定性诊断：首先确定是否乳糜尿。送尿液作乳糜试验，如为阳性，则乳糜尿可以确诊。(2)定位诊断;当乳糜尿合并全程血尿时，镜检有管型或乳糜凝块，表明乳糜尿来自肾脏。作膀胱镜检查可观察到乳糜尿来自哪一侧上尿路。逆行尿路造影在部分病人中可见到肾盏淋巴逆流现象，对乳糜尿定位诊断有重要价值。淋巴管造影能直接观察到肾内、肾周、腹腔及盆腔淋巴管和淋巴结.以及乳糜池和胸导管等部位的淋巴流通情况，对淋巴系统病变及瘘道的定位诊断很有价值。治疗方法：(1)饮食治疗：发作期间忌食脂肪及油类食物，多饮水。(2)药物治疗：当血或尿中找到微丝蚴时，服用海群生、卡巴松。(3)肾盂灌注疗法：患侧输尿管插管至肾盂，用20%碘化钠或1%～2%硝酸银溶液作肾盂灌注，每次6mL左右，反复冲洗数次，常有迅速停止乳糜尿的效果。(4)手术治疗：可行肾蒂淋巴管结扎术、腰干淋巴管与精索内静脉吻合术、腹股沟淋巴结大隐静脉吻合术、经精索内淋巴管静脉吻合术及显微淋巴管静脉内植入术等。(5)中药治疗。
第2题：
试述鲜乳贮存过程中的微生物学的变化。
正确答案: 鲜乳贮存过程中，发生下列微生物学变化：
（1）细菌减数阶段：刚挤出的乳汁在一定时间内具有杀菌和抑菌作用，乳中微生物的总数不但不增多，反而相应减少，这一阶段持续时间因乳中所含微生物的数量及保存温度而不同。
（2）发酵产酸阶段：在杀菌作用减退的同时，存在于乳中的各种微生物开始生长繁殖，乳酸菌将乳糖发酵产生大量乳酸，使PH迅速下降，抑制其他微生物的继续生长繁殖，此时乳液出现凝块。
（3）中和阶段：由于大量乳酸的存在，使多数微生物的活动受到抑制，但霉菌和酵母菌适合在酸性环境中生长繁殖，它们不仅能分解利用乳酸和其他有机酸，还能分解蛋白质，生成碱性副产品，以中和乳中的酸，此时常可在乳汁表面看到浓厚的霉菌团。
（4）腐败分解阶段：当乳酸和其他有机酸，因酵母菌及霉菌的活动而消失，乳汁的PH由酸性变为中性或碱性时，乳中的腐败菌等重新开始活动，主要分解酪蛋白，使乳变为澄清的液体。最后，营养分解完毕，或有害物质积累到一定程度时，微生物的作用也就完全停止。此时的鲜乳不仅营养几乎完全丧失，而且会有毒性，不可食用。
第3题：
诊断感染性疾病的方法包括传统的微生物学方法、免疫学方法、血液学方法和新发展的分子诊断方法，这些方法各有利弊，在实际工作中应注重将分子诊断技术与其他诊断技术结合应用，以利于疾病快速、准确地诊断。能早期、快速地诊断感染性疾病的方法是A、微生物学方法
B、免疫学方法
C、血液学方法
D、分子诊断方法
E、生物化学方法
除了分子诊断方法，还可进行感染性疾病病因学诊断的方法有A、免疫学方法
B、血液学方法
C、微生物学方法
D、临床检验学方法
E、生物化学方法
参考答案：问题 1 答案：D
问题 2 答案：C
问题 2 答案：C
第4题：
诊断感染性疾病的方法包括传统的微生物学方法、免疫学方法、血液学方法和新发展的分子诊断方法，这些方法各有利弊，在实际工作中应注重将分子诊断技术与其他诊断技术结合应用，以利于疾病快速、准确地诊断。除了分子诊断方法，还可进行感染性疾病病因学诊断的方法有（）
- A、免疫学方法
- B、血液学方法
- C、微生物学方法
- D、临床检验学方法
- E、生物化学方法
正确答案:C
第5题：
试述一位著名的微生物学家对微生物学的主要贡献？你从中有何启发。
正确答案: 巴斯德：发酵的实质；否定了生物的自然发生说；巴斯德消毒法；疫苗生产法。
启发：勇于实践，实践－理论－实践。勤奋。不畏权威。
第6题：
试述细菌性疾病的微生物学诊断程序。
正确答案: 一、料的采集、保存和运送
1、采集遵循的原则：
（1）防止污染：剖检场所：应选择便于消毒、不渗水的解剖地点，最好有专门的剖检场所和剖检台 。剖检前，动物尸体应浸泡消毒；做好个人防护：剖检过程中，注意个人防护；做好个人防护：剖检过程中，注意个人防护；焚烧或深埋：剖检后动物尸体和病料焚烧灭菌或消毒深埋。
（2）无菌采样：目的：防止病料被污染；措施：所用器械和器皿必须灭菌，点燃酒精灯，注意无菌操作。
（3）适时采样：细菌丰富增殖时期、病料应该新鲜：取濒死动物或刚死亡的动物，死亡动物采集病料夏天不宜迟于6～8h，冬天不迟于24h。
（4）适当部位：根据疾病的类型和表现采集病变最典型的部位。
2、病料采集方法（不同病料不同方法）
（1）实质脏器：剖开体腔后，立即采集，置于无菌容器内；污染或剖开过久的被检器官：先烧烙表面，然后在烧烙的深部取一块实质脏器，放在灭菌容器内。如有细菌检验条件，可在剖检后直接做病料的触片染色和细菌的分离培养。
（2）液体材料：脓汁、胸水一般用灭菌的棉棒或吸管吸取放入试管内，塞好棉塞送检。血液可无菌操作从静脉或心脏采血，然后加抗凝剂（每1ml血液加3.8%枸橼酸钠0.1ml）。若需分离血清，则采血后放在灭菌的容器中，摆成斜面，待血液凝固析出血清后，再将血清吸出，置于另一灭菌试管中送检。
（3）其他病料：皮肤要取有病变且带有一部分正常皮肤的部位；被毛或羽毛要取病变明显部位，并带毛根，放平皿； 胎儿可将流产胎儿送往实验室，也可用吸管或注射器吸取胎儿胃内容物放入试管送检； 肠道及内容物只需选择病变最明显的部分，将其中内容物去掉，用灭菌水轻轻冲洗后放在平皿内。
3、病料的保存和送检
（1）保存：低温保存，4-10度；灭菌液体石蜡；30%甘油缓冲盐水。
（2）送检：尽快送检，并做好记录（畜主姓名、动物种类、地址、发病情况、欲检部位及检验项目、采集时间等）。
二、病料中细菌检查方法
（一）形态学检查
光学显微镜检查染色标本检查法，单染色法（如美蓝染色法、复红染色法等），复染色法（如革兰氏染色法、抗酸染色法等），特殊染色法（鞭毛染色法、荚膜染色法、芽 孢染色法等），不染色标本检查法（悬滴法、压滴法）。
（二）分离培养
1、细菌分离培养对细菌病诊断的意义
培养基中有无细菌生长推断是否为细菌病，菌落的特征用以判断细菌种类，为进一步的生化鉴定、血清学鉴定及动物试验获得纯培养，药敏试验。
2、分离培养方法：
（1）通常用平板培养基对细菌进行分离培养，根据细菌的培养特性选择适合目标菌生长培养基。
（2）相同条件培养的相同培养基上，不同细菌的菌落大小、形态、色泽、表面特征、边缘状态、隆起度、透明度等特征不同。有的细菌在鲜血琼脂平板上形成溶血环。
（3）也可采用选择培养基或鉴别培养基，以起到抑制杂菌或快速鉴别的效果，比如肠道杆菌科可选择麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂等。
（三）细菌的生化试验
（1）糖类分解试验：糖分解（发酵）试验、甲基红试验、V-P试验等。
（2）蛋白质类分解试验：硫化氢试验、靛基质试验等。
（3）其他类型试验：触酶试验、尿素酶试验等。
（四）动物试验
（1）将分离鉴定的细菌液接种到动物体内，观察动物发病情况，进一步确认病原。
（2）或者将可疑病料处理液接种敏感动物，以观察典型表现；将分离鉴定的细菌液接种到动物体内，观察动物发病情况，进一步确认病原；或者将可疑病料处理液接种敏感动物，以观察典型表现。
（五）血清学试验
抗原+抗体→原抗体复合物（可见反应），用已知抗体检测动物体内的病原菌，用已知的病原菌抗原检测动物血清中的抗体。临床诊断中，可用于细菌的血清分型、快速诊断或大群检疫。
（六）分子生物学方法：分子生物学技术对病原菌的快速诊断和不能人工培养的细菌的探索发挥巨大的作用。PCR技术、核酸分子杂交技术等。
第7题：
炭疽病急性、亚急性临床症状及常用诊断方法？
正确答案: 症状：高温、肿、血尿、便中带血等症状，另外呈现天然孔流血，血液呈黑红色，凝固不全，脾脏高度肿大。
常用诊断方法：细菌学诊断，炭疽杆菌：长而直的大杆菌，长3-8um，宽1-1.5um，在培养基中形成长链；在动物体内形成荚膜；和空气接触能形成芽孢；革兰氏染色阳性。
血清学诊断：采用沉淀反应来进行。
重叠法：吸炭疽沉淀素血清加入管内→用另一毛细血管吸沉淀原沿管壁加等量于血清上→15min内判定。
逆叠法：先加入沉淀原→用另一支吸管吸炭疽沉淀素血清→插入管底→因血清比重大，故沉淀原浮起→3min内判定。
第8题：
诊断炭疽病的血清方法是（ ）。
正确答案：环状沉淀试验
第9题：
诊断感染性疾病的方法包括传统的微生物学方法、免疫学方法、血液学方法和新发展的分子诊断方法，这些方法各有利弊，在实际工作中应注重将分子诊断技术与其他诊断技术结合应用，以利于疾病快速、准确地诊断。能早期、快速地诊断感染性疾病的方法是（）
- A、微生物学方法
- B、免疫学方法
- C、血液学方法
- D、分子诊断方法
- E、生物化学方法
正确答案:D
第10题：
试述淋球菌的微生物学检查。
正确答案:淋球菌菌对外界环境抵抗力弱，标本应及时运送与培养。
1.直接涂片检查：分泌物直接涂片，革兰氏染色，镜检，可见细胞内有革兰氏阴性双球菌存在。
2.分离培养：接种巧克力琼脂，巧克力琼脂中加万古霉素、粘霉素、二培养厢中37℃培养24小时，见灰色、半透明呈水滴样小菌性霉素等，在5%CO2落。生化鉴定：氧化酶和触酶均阳性，可利用葡萄糖。
3.非培养方法：免疫学方法，核酸探针杂交法。