100907生物制药专业
简述真核基因在原核细胞中获得表达必须具备的三个条件。
题目
简述真核基因在原核细胞中获得表达必须具备的三个条件。
参考答案和解析
正确答案:
（1）要有原核细胞的启动子；
（2）要有能与原核细胞16SrRNA3’端相配合的顺序；
（3）表达的干扰素多肽要不被细胞酶类所迅速降解。
（2）要有能与原核细胞16SrRNA3’端相配合的顺序；
（3）表达的干扰素多肽要不被细胞酶类所迅速降解。
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相似问题和答案
第1题：
简述餐厅必须具备的三个条件？
正确答案:1、具备一定的场所
2、能为客人提供菜肴、饮料和服务
3、具有一定的接待能力的餐饮空间和设施
第2题：
培养基必须具备三个条件是①（）；②（）；③（）。
正确答案:含有该菌株生长所需的条件；具有一定的生长反应；经过严格灭菌，保持无菌状态
第3题：
真核基因在大肠杆菌中以什么形式表达?
参考答案：融合蛋白。
第4题：
简述真核与原核细胞中翻译起始的主要区别。
正确答案:主要区别来自mRNA的本质差异以及小亚基与mRNA起始密码子上游区结合的能力。
原核细胞mRNA较不稳定且多是多顺反子，在IF3介导下与核糖体小亚基16SrRNA结合。
真核细胞需要几种起始因子来帮助mRNA形成起始复合物。一旦结合则核糖体开始相下游搜索直到找到第一个密码子。
第5题：
简述真核基因表达的特点。
正确答案: （1）细胞的全能性：所谓全能性是指同一种生物的所有细胞都含有相同的基因组DNA。
（2）基因表达的时间性和空间性：高等生物的各种不同细胞具有相同的基因组，但在个体发育的不同阶段，基因表达的种类和数量是不同的，在不同组织和器官中，基因表达的种类和数量不同。
（3）转录和翻译分开进行：在核中转录生成mRNA，穿过核膜至胞质指导蛋白质合成。
（4）初级转录产物要经过转录后加工修饰。
（5）不存在超基因式操纵子结构：真核生物基因转录产物为单顺反子，一条mRNA只翻译一种蛋白质。
（6）部分基因多拷贝。
第6题：
简述发盘必须具备的三个条件。
正确答案: （1）发盘又称为报盘、发价、报价。法律上称为“要约”是一个或一个以上特定的人提出的订立合同的建议，如果十分确定并且表明发盘人在得到接受时承受约束的意旨，即构成发盘。
（2）发盘构成条件一：向一个或一个以上的特定人提出。
（3）发盘构成条件二：表明订立合同的意思。
（4）发盘构成条件三：发盘的内容必须十分确定。
第7题：
外源基因在原核细胞中表达，常用的启动子有（）、（）、（）、（）、（）和（）。
正确答案:乳糖启动子；Trp启动子；Tac启动子；噬菌体的PL；PR启动子；脂蛋白启动子
第8题：
基因药物发展经历了三个阶段。其一是细菌基因工程，它是通过原核细胞(常用大肠杆菌)来表达目的基冈。然而不少人类或哺乳动物的基因在细菌等原核生物中不能表达，或者表达的目的产品往往没有生物活性，必须经过一系列的修饰加工、剪切后才能成为有效的药物。这个过程是相当复杂的，成本和工艺上也有很多问题。
从这段文字我们不能推出的是( )。
A．“人类或哺乳动物的基因”是“目的基因”
B．“表达的目的产品”是在原核细胞中产生的
C．“原核生物”是细菌
D．“没有生物活性”的目的产品，不能直接作为“有效的药物”
正确答案：C
C [解析]由原文“人类或哺乳动物的基因在细菌等原核生物”可得：细菌是一种原核生物，但原核生物并不等于细菌，故C项错误。
C [解析]由原文“人类或哺乳动物的基因在细菌等原核生物”可得：细菌是一种原核生物，但原核生物并不等于细菌，故C项错误。
第9题：
如何实现真核生物一蛋白基因在大肠杆菌细胞中受控、稳定、分泌和高效表达。
正确答案: 大肠杆菌是高效表达异源蛋白最常用的原核表达系统。由于每种基因都有其独特的结构、mRNA的稳定性和翻译效率、蛋白质折叠的难易程度，修主细胞蛋白酶对蛋白质的降解等等原因，因此并非每一种基因都能在大肠杆菌中有效表达。下面浅谈一下实现真核生物一蛋白基因在大肠杆菌细胞中受控、稳定、分泌和高效表达的策略。
首先，要构建有效的表达载体，一种高效的原核表达载体需要包括一个强大并且可以严紧调节的启动子；一位于翻译起始密码子5’端大约9bp的SD序列；位于目的基因3’末端的一个高效转录终止子。除此之外，载体还需要一个复制起点，筛选标记和利于对启动子活性进行严紧调节的基因。这种调节元件可以插入载体自身，也可以插入宿主的染色体。其他的元件包括转录和翻译增强子等。这些元件的作用往往具有基因特异性，因此要根据不同的情况加以取舍。构建表达载体，需要仔细考虑多种元件的组合，以保证最高水平的蛋白质合成。
a、提高转录水平调控的策略
（1）选择的启动子要具有适合高水平蛋白质合成的某些特性。首先启动子的作用要强；第二，它必须表现最低水平的基础转录活性。若要求高效的基因表达，最好选用高密度培养细胞和表现最低活性的可诱导和非抑制启动子。
（2）现在已鉴定了一些在E.coli中显著增强异源基因表达的序列，有可能利用增强子来达到超量表达蛋白质的目的。（3）虽然转录终止子在表达质粒的构建过程中常被忽略，但有效的转录终止子是表达载体必不可少的元件。
b、提高翻译水平调控的策略
（1）mRNA5’末端的独特结构是mRNA翻译起始效率的最主要决定因素，因此找到通用的有效起始翻译的共同序列能高效起始外源蛋白的翻译。
（2）SD与起始密码子间的距离约为5-13bp，这一距离影响翻译起始的效率，因此在设计载体中要控制好这段距离。（3）在mRNA的翻译起始区的二级结构在决定基因表达效率方面具有重要作用，使用一些策略使mRNA形成二级结构的可能性最小。
（4）mRNA的快速降解势必影响蛋白质的产生，比如可以通过选用缺乏某些特定RNase如RNaseII或PNPase的宿主菌来提高基因的表达，这将在E.coli高效表达外源基因中有很大作用。
（5）在mRNA中存在终止信号是翻译终止过程必不可少的，在设计表达载体时，通常插入三个终止密码子以防止核糖体的跳跃，在E.coli中偏向于使用UAA密码子。
c、维护真核生物蛋白基因在大肠杆菌细胞稳定性和减少E.coli中重组蛋白裂解的策略
（1）将蛋白质靶向细胞周质或培养基
（2）在较低的温度下培养细菌
（3）选用蛋白酶缺陷的菌株
（4）构建N-末端或C-末端融合蛋白；融合系统能够产生大量的可溶性的融合蛋白，为E.coli中高效表达和纯化重组蛋白提供了极大方便。
（5）将目的基因多拷贝串联
（6）与分子伴侣共表达
（7）替换特定的氨基酸残基以消除蛋白酶裂解位点
（8）改善蛋白质的亲水性
（9）优化培养条件，E.coli中的蛋白质产量可以通过高细胞密度培养系统而获得显著提高，
d、提高真核生物蛋白基因在大肠杆菌细胞分泌的策略
（1）将蛋白质分泌到细胞外是人们最期望的一种策略。因为这样容易纯化目的蛋白质，减少细菌的蛋白酶对目的蛋白质的裂解。但是，E.coli在正常情况下只有很少量的蛋白质分泌到细胞外。在大肠杆菌表达系统中，金黄色葡萄球菌A蛋白的信号肽能引导带有E结构域的A蛋白片段或融合产物从细胞质外泌到培养基中，如果能利用可控的强启动子进行A蛋白信号肽引导的基因表达，则有望在蛋白质外泌方面有所突破。
（2）对培养基的特殊操作能明显提高蛋白质释放到培养基中。例如，在培养基中添加甘氨酸能增强外周质蛋白释放到培养基中，且不引起明显的细菌裂解。
质粒的构建，SD序列，信号肽，糖基化，启动子
第10题：
根据真核基因在原核细胞中表达的特点，表达载体必须具备哪些条件？
正确答案:表达载体必须具备下列条件：
（1）能够独立的复制；
（2）具有灵活的克隆位点和方便的筛选标记，以利于外源基因的克隆、鉴定和筛选；
（3）应具有很强的启动子，能为大肠杆菌的RAN聚合酶所识别；
（4）应具有阻遏子；
（5）应具有很强的终止子；
（6）所产生的mRNA必须具有翻译的起始信号。