03024生物化学及生化技术
什么是沉淀法，简述沉淀蛋白质的几种主要方法的原理及应用。
题目
什么是沉淀法，简述沉淀蛋白质的几种主要方法的原理及应用。
参考答案和解析
正确答案:沉淀法：利用某种试剂使生物大分子沉淀，但不影响大分子结构的方法。
主要方法：
（1）中性盐沉淀（盐析法）：中性盐的亲水性大于蛋白质和酶分子的亲水性，所以在加入大量中性盐后，其夺走了水分子，破坏了水膜。同时又中和了电荷，破坏亲水胶体，蛋白质分子即形成沉淀。
应用：除了蛋白质和酶以外，多肽、多糖和核酸等都可以用盐析法进行沉淀分离。盐析法应用最广的还是在蛋白质领域。
（2）有机溶剂沉淀法：降低了水溶液的介电常数，减小了溶剂的极性。同时削弱了溶剂分子与蛋白质分子间的相互作用，从而导致蛋白质溶解度降低而沉淀。除此以外，使带电溶质分子更易互相吸引而凝集，破坏了蛋白质的水化膜，从而发生沉淀。
应用：生化制备。
（3）选择性变性沉淀法：利用蛋白质、酶与核酸等生物大分子与非目的生物大分子在物理化学性质等方面的差异，选择一定的条件使杂蛋白等非目的物质变性沉淀而得到提纯，称为选择性变性沉淀法。
应用：通常用于生物大分子分离纯化的初期，是分离纯化流程中附带进行的一个分离纯化步骤。
（4）等电点沉淀法：等电点沉淀法是利用具有不同等电点的两性电解质在达到电中性时溶解度最低，易发生沉淀，从而实现分离的方法。
应用：此法主要用于在分离纯化流程中去除杂蛋白，而不用于沉淀目的物。
（5）有机聚合物沉淀
主要方法：
（1）中性盐沉淀（盐析法）：中性盐的亲水性大于蛋白质和酶分子的亲水性，所以在加入大量中性盐后，其夺走了水分子，破坏了水膜。同时又中和了电荷，破坏亲水胶体，蛋白质分子即形成沉淀。
应用：除了蛋白质和酶以外，多肽、多糖和核酸等都可以用盐析法进行沉淀分离。盐析法应用最广的还是在蛋白质领域。
（2）有机溶剂沉淀法：降低了水溶液的介电常数，减小了溶剂的极性。同时削弱了溶剂分子与蛋白质分子间的相互作用，从而导致蛋白质溶解度降低而沉淀。除此以外，使带电溶质分子更易互相吸引而凝集，破坏了蛋白质的水化膜，从而发生沉淀。
应用：生化制备。
（3）选择性变性沉淀法：利用蛋白质、酶与核酸等生物大分子与非目的生物大分子在物理化学性质等方面的差异，选择一定的条件使杂蛋白等非目的物质变性沉淀而得到提纯，称为选择性变性沉淀法。
应用：通常用于生物大分子分离纯化的初期，是分离纯化流程中附带进行的一个分离纯化步骤。
（4）等电点沉淀法：等电点沉淀法是利用具有不同等电点的两性电解质在达到电中性时溶解度最低，易发生沉淀，从而实现分离的方法。
应用：此法主要用于在分离纯化流程中去除杂蛋白，而不用于沉淀目的物。
（5）有机聚合物沉淀
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相似问题和答案
第1题：
蛋白质沉淀法常用的方法包括：（）、（）、（）和（）。
正确答案:中性盐沉淀法；有机溶剂沉淀法；等电点沉淀法；有机聚合物沉淀法
第2题：
重量分析法有哪几种方法？什么叫沉淀法？什么叫气化法？
正确答案: 重量分析法是将待测组分与试样中的其他组分分离，然后称重，根据称量数据计算出试样中待测组分含量的分析方法。根据被测组分与试样中其他组分分离的方法不同，重量分析法通常可分为沉淀法、气化法、电解法。
沉淀法：利用沉淀反应使待测组分以难溶化合物的形式沉淀出来，将沉淀过滤、洗涤、烘干或灼烧后称重。很据称得的质量，求出被测组分的含量。沉淀法是重量分析中最常用的方法。
气化法：利用物质的挥发性质，通过加热或蒸馏等方法使待测组分从试样中挥发逸出，然后根据气休逸出前后试样质量的减少来计算被测组分的含量。
第3题：
简述沉淀法测定高密度脂蛋白胆固醇的原理。
正确答案: 运用沉淀法将高密度脂蛋白（HDL）与低密度脂蛋白（LDL）和极低密度脂蛋白（VLDL）分开，然后测定HDL中的胆固醇含量。其原理是根据LDL及VLDL中的载脂蛋白B（ApoB.含有较多的碱性氨基酸，在二价阳离子存在下可与多聚阴离子形成复合物。目前多聚阴离子和二价阳离子用于分离沉淀LDL和VLDL的试剂种类较多，其中有肝素-锰（Mn2+）、肝素-钙（Ca2+）、肝素-Ca-镍（Ni2+）、硫酸葡聚糖-镁（Mg2+）、硫酸葡聚糖-Ca2+等。也有用聚乙烯醇（PEG）及伴刀豆球蛋白（ConA.作为LDL和VLDL的分离沉淀剂。现在的自动分析仪多采用不需沉淀的直接一步法。
第4题：
常用沉淀法的种类及原理。
正确答案: 盐析沉淀法：利用不同蛋白质在不同的盐浓度条件下溶解度不同的特性，通过在酶液中添加一定浓度的中性盐，使酶或杂质从溶液中析出沉淀，从而使酶与杂质分离。
等电点沉淀法：利用两性电解质在等电点时溶解度最低，以及不同的两性电解质有不同的等电点这一特性，通过调节溶液的pH值，使酶或杂质沉淀析出，从而使酶与杂质分离。
有机溶剂沉淀法：利用酶与其它杂质在有机溶剂中的溶解度不同，通过添加一定量的某种有机溶剂，使酶或杂质沉淀析出，从而使酶与杂质分离。
复合沉淀法：在酶液中加入某些物质，使它与酶形成复合物而沉淀下来，从而使酶与杂质分离。
第5题：
有机溶剂沉淀法原理是什么？
正确答案: 加入有机溶剂于蛋白质溶液中可产生多种效应，这些效应结合起来，使蛋白质沉淀。
①有机溶剂，使溶液介电常数降低，蛋白质、核酸、多糖等带溶质间静电引力增大，从而相互吸引、聚集而沉淀。
②有机溶剂减小水的极性，使两性溶质在溶液中的溶解度降低。
③由于有机溶剂的水合作用，降低了自由水的浓度，从而降低了亲水溶质表面水化层的厚度和溶质的亲水性，导致脱水凝聚。
④极性有机溶剂破坏溶质的某种键（如氢键），使其空间结构发生变形，使原来包在内部的疏水基团结合形成疏水层。
第6题：
沉淀蛋白质的主要方法有几种？
正确答案:（1）盐析：破坏蛋白质的胶体性。
（2）重金属盐：与蛋白质结合成盐。
（3）生物碱及某些酸类与蛋白质结合成盐。
（4）有机溶剂：破坏蛋白质的胶体性。
（5）加热凝固。
第7题：
简述有机溶剂沉淀法的原理。
正确答案: ①有机溶剂，使溶液介电常数降低，蛋白质、核酸、多糖等带溶质间静电引力增大，从而相互吸引、聚集而沉淀。
②有机溶剂减小水的极性，使两性溶质在溶液中的溶解度降低。
③由于有机溶剂的水合作用，降低了自由水的浓度，从而降低了亲水溶质表面水化层的厚度和溶质的亲水性，导致脱水凝聚。
④极性有机溶剂破坏溶质的某种键（如氢键），使其空间结构发生变形，使原来包在内部的疏水基团结合形成疏水层。
第8题：
离心沉淀法的原理、操作和注意事项是什么？
正确答案: 原理：利用沉降系数的差异将供试品和微生物进行分离；
操作：取规定量的供试液，3000转/分离心20分钟（供试液如有沉淀，先以500转/分离心5分钟，取全部上清液再离心），弃去上清液，留底部集菌液约2ml，加稀释剂至原规定量.
注意事项：真菌由于沉降系数比较小，500r/min离心5min，黑曲霉、白色念珠菌回收率为20%，因此其检查不适宜用低速离心沉淀法.
第9题：
在生物物质分离纯化方法中，沉淀法是常用的方法之一，主要包括（）
- A、有机溶剂沉淀法
- B、盐析法
- C、化学沉淀法
- D、等电点沉淀法
- E、离子交换沉淀法
正确答案:B,D,E
第10题：
简述几种测定蛋白质分子量的方法及原理。
正确答案: （1）沉降速度法（利用超速离心机）；
（2）凝胶过滤法（利用一种葡聚糖凝胶，但用洗脱液时，被排阻的相对分子质量大的分子，先被洗脱下来，相对分子小的从大到小依次）
（3）SDS-聚丙烯酰胺凝胶液电脉法（各蛋白质分子大小不同电泳不同）