现代生化药学

为什么PCR中对产物进行终点检定量不准确？

题目

为什么PCR中对产物进行终点检定量不准确？

参考答案和解析
正确答案:随着PCR的进行，反应体系中的引物、dNTP，甚至模板都会供不应求，导致PCR的效率下降，产物增长速度越来越慢。直到Taq酶都被饱和后，反应就进入平台期。在实际实验中，由于各种环境因素的复杂相互影响，每个反应进入平台期的时间及平台期的高低都不同，导致终产物浓度各不相同。即使是重复实验，也不可能做到同时进入平台期。因此反应终产物与原始拷贝数无线性关系，定量不准确。
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相似问题和答案

第1题：

有关RT-PCR实验的叙述中正确的是( )

A、需要先进行PCR，再进行逆转录

B、该反应的最初起始模板不是DNA

C、合成的终产物是基因组DNA

D、在进行PCR时，模板不是cDNA

E、逆转录合成的产物是RNA


参考答案：B

第2题：

用序列特异性寡核苷酸探针杂交对PCR产物进行分析的HLA分型法是 ( )

A、PCR-RFLP

B、PCR-SSOP

C、SBT

D、PCR-SSCP

E、MLC


参考答案：B

第3题：

下列产品哪些属于金属板式实时定量PCR仪

A、LightCycleTM荧光定量PCR仪

B、ABI7500荧光定量PCR仪

C、MJ公司Chromo4荧光定量PCR仪

D、Bio－rad公司iCycler荧光定量PCR仪

E、Rotor－Gene3000荧光定量PCR仪


参考答案：BCD

第4题：

荧光定量PCR的产物应设计的最佳长度范围是（），以确保扩增效率。

  • A、100-250bp
  • B、不超过50bp
  • C、300-500bp
  • D、800-1000bp

正确答案:A

第5题：

关于定量PCR，错误的是

A、可以定量或半定量检测PCR产物的方法

B、定量PCR主要进行基因表达的分析和病原体的核酸检测

C、水解探针技术中TaqMan探针的位置位于两条引物之间

D、分子信标在自由状态下为发夹结构，荧光信号极低

E、定量PCR在封闭状态下进行，有效避免了产物的实验室污染


参考答案：A

第6题：

以空气为加热介质的PCR仪是

A、金属板式实时定量PCR仪

B、96孔板式实时定量PCR仪

C、离心式实时定量PCR仪

D、各孔独立控温的定量PCR仪

E、荧光实时定量PCR仪


参考答案：C

第7题：

下列检测方法中可以准确定量测定原始mRNA拷贝数的是

A、RNA分子杂交

B、DNA分子杂交

C、ASO

D、PCR-ASO

E、RT-PCR


参考答案：E

第8题：

荧光定量PCR检测因为具有自动化程度高、易于标准化、产物闭管检测减少污染、定量报告检测结果等诸多优点，现在临床检验中应用越来越广泛，它与常规PCR相比在很多方面都有其特点。荧光定量PCR方法中不是基于FRET原理设计的是A、双链DNA染料结合法

B、水解探针法

C、分子信标法

D、杂交探针法

E、荧光标记引物法

检测原理利用了Taq酶5′→3′外切酶活性的是A、双链DNA染料结合法

B、水解探针法

C、分子信标法

D、杂交探针法

E、荧光标记引物法

荧光定量PCR方法中最容易出现假阳性的是A、双链DNA染料结合法

B、水解探针法

C、分子信标法

D、杂交探针法

E、荧光标记引物法

与常规PCR相比，荧光定量PCR的缺陷是A、定量仅根据指数扩增期

B、灵敏性太高

C、降低了携带污染

D、无法检测扩增子大小

E、增加了实验室污染的概率

关于外标法荧光定量PCR错误的是A、为了定量准确，外标法标准曲线需要5个点以上，还需设阴性对照和阳性对照

B、被检标本与标准品扩增效率之间的不一致会影响定量准确性

C、是目前临床实验室应用最广泛的一种方法

D、DNA标准品常是含有待测基因的一定浓度的质粒

E、对于RNA病原体，标准品通常是一定浓度的RNA


参考答案：问题 1 答案：A


问题 2 答案：B


问题 3 答案：A


问题 4 答案：D


问题 5 答案：E

第9题：

荧光定量PCR检测因为具有自动化程度高、易于标准化、产物闭管检测减少污染、定量报告检测结果等诸多优点，现在临床检验中应用越来越广泛，它与常规PCR相比在很多方面都有其特点。荧光定量PCR方法中最容易出现假阳性的是（）

  • A、双链DNA染料结合法
  • B、水解探针法
  • C、分子信标法
  • D、杂交探针法
  • E、荧光标记引物法

正确答案:A

第10题：

解释PCR、DNA—PCR、RT—PCR、原位PCR和定量PCR？


正确答案:（1）PCR是聚合酶链反应（Polymerase chain reaction）的英文缩写，是近年来发展起来的一种在体外特异扩增某一目的DNA片段的技术。
（2）DNA—PCR：以DNA为模板，扩增特定核苷酸序列。主要用于检测特定基因或DNA片段的存在，并常与核酸分子杂交结合，分析检定基因突变。
（3）RT—PCR：用提取的mRNA或总RNA（含有mRNA）为模板，通过逆转录扩增cDNA。是检测特定基因表达水平的主要方法之一，也是用于鉴别、诊断RNA病毒的重要技术。
（4）原位PCR：与原位杂交一样，原位PCR也无需提取DNA/RNA，直接用组织切片和细胞进行PCR或RT—PCR。它既能鉴定含有靶DNA/RNA序列的细胞，又能确定靶DNA/RNA序列在细胞内或染色体上的位置。
（5）定量PCR：PCR产物经凝胶电泳分离转移膜上，与放射性核素或化学发光标记的核酸探针杂交。根据放射自显影或化学发光后底板爆光的强弱，用密度计扫描定量。此法在基因诊断中应用甚广。

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