医学分子生物学
简述基因克隆的主要过程。
题目
简述基因克隆的主要过程。
参考答案和解析
正确答案:
①制备目的基因和相关载体；
②将目的基因和有关载体进行链接；
③将重组的DNA导入受体细胞；
④DNA重组体的筛选和鉴定；
⑤DNA重组体的扩增、表达和其他研究。
②将目的基因和有关载体进行链接；
③将重组的DNA导入受体细胞；
④DNA重组体的筛选和鉴定；
⑤DNA重组体的扩增、表达和其他研究。
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相似问题和答案
第1题：
下列关于克隆的说法不正确的是（）
- A、由一个受精卵发育为一个完整的个体叫做克隆
- B、基因克隆是指其目的基因复制的过程
- C、动物体细胞克隆要通过细胞核移植形成重组细胞
- D、动物克隆的技术基础是动物细胞培养
正确答案:A
第2题：
基因克隆过程中，获得目的基因的途径有哪些？
正确答案: （1）从基因组文库（genomic library）中获得；
（2）从cDNA文库中获得；
（3）PCR扩增特定基因；
（4）人工合成。
第3题：
简述单克隆抗体的制备过程。
参考答案：经筛选和克隆化的杂交瘤细胞仅能合成及分泌单一抗原表位的特异性抗体，是单克隆抗体。单抗的制作过程大体分为抗原的制备，动物的免疫，b细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，筛选杂交瘤细胞，筛选能产生某种特异性单抗的杂交瘤细胞，杂交瘤细胞的克隆化，体外大规模培养或动物腹腔培养特异性杂交瘤细胞克隆，单抗的纯化及鉴定。
第4题：
下列关于克隆的说法，错误的是（）
- A、由一个受精卵发育为一个完整的个体叫做克隆
- B、基因克隆是指某目的基因复制的过程
- C、动物体细胞克隆要通过细胞核移植形成重组细胞
- D、动物克隆的技术基础是动物细胞的培养
正确答案:A
第5题：
简述体外克隆基因的操作。
正确答案:（1）从复杂的生物有机体基因组中，经过酶切消化或PCR扩增等步骤，分离出带有目的基因的DNA片段；
（2）在体外，将带有目的基因的外源DNA片段连接到能够自我复制的并具有选择记号的载体分子上，形成重组DNA分子；
（3）感受态细胞的制备—氯化钙法
（4）转化（transformation）
感受态细胞与连接产物轻轻混匀，冰浴30min，42℃水浴热激60–90s，快速冰浴2min加液体LB振荡培养，使细胞复苏。
（5）筛选（screening）
①根据重组载体的表型【抗药性（Ampr、Tetr）、其他mark（a-互补筛选）】
②根据DNA限制酶的酶谱分析
③PCR反应
第6题：
基因工程制药中常用的目的基因克隆载体主要有M13噬菌体和粘粒。
正确答案:错误
第7题：
利用定位克隆策略首先克隆的基因是（）。
- A、DMD基因
- B、CF基因
- C、c-myc基因
- D、p53基因
正确答案:A
第8题：
关于疾病相关基因的克隆，下述说法哪些正确
A.包含功能克隆和定位克隆两种策略
B.人类基因组计划的完成可以促进疾病相关基因的克隆
C.在基因定位不清的情况下无法克隆相关基因
D.可以先纯化功能异常的蛋白分子，再克隆相关基因
B.人类基因组计划的完成可以促进疾病相关基因的克隆
C.在基因定位不清的情况下无法克隆相关基因
D.可以先纯化功能异常的蛋白分子，再克隆相关基因
答案：A,B,D
解析：
第9题：
基因克隆的方法主要有哪几种？简述各种方法的作用及用途。
正确答案: 1、RACE技术，用于在已知cDNA序列的基础上克隆5’端和3’端缺失的序列。
2、应用cDNA差示分析法克隆基因，在没有任何探针的情况下，通过降低cDNA群体复杂性和更换cDAN两端接头的方法特异性的扩增目的基因片段。
3、Gateway大规模克技术，用于实现不需要传统的酶切连接过程的基因快速克隆和载体间平行转移，为大规模克隆基因组注视的可译框架提供保障。
4、基因的图位克隆法，用于分离未知形状目的基因。
第10题：
下列哪项不是分子克隆的主要步骤（）
- A、目的基因的表达
- B、基因文库的建立
- C、目的基因的筛选
- D、目的基因的分析
正确答案:A