医学分子生物学

双脱氧核苷酸末端终止法

题目

双脱氧核苷酸末端终止法

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第1题:

末端脱氧核苷酸转移酶的作用。


正确答案:末端脱氧核苷酸转移酶能将脱氧核苷酸加到DNA的3ˊ-OH上,主要用于探针标记;或者在载体和待克隆的片段上形成同聚物尾,以便于进行克隆。

第2题:

蛋白质测序仪的基本工作原理,主要是利用()。

  • A、Edman降解法
  • B、双脱氧链末端终止法
  • C、化学降解法
  • D、氧化-还原法
  • E、水解法

正确答案:A

第3题:

Sanger双脱氧终止法对DNA测序时,下列哪种核苷酸的加入会使DNA链延长终止()

A、dGTP

B、dTTP

C、dCTP

D、Datp


参考答案:C

第4题:

双脱氧合成终止法测DNA序列时,加A体系中所得到的DNA片段都是以哪个核苷酸结尾()。

  • A、A
  • B、C
  • C、G
  • D、T
  • E、U

正确答案:A

第5题:

简述利用双脱氧末端终止法(Sanger法)测定DNA一级结构的原理与方法?


正确答案: 原理是采用核苷酸链终止剂—2,,3,-双脱氧核苷酸终止DNA的延长。由于它缺少形成3/5/磷酸二脂键所需要的3-OH,一旦参入到DNA链中,此DNA链就不能进一步延长。根据碱基配对原则,每当DNA聚合酶需要dNMP参入到正常延长的DNA链中时,就有两种可能性,一是参入ddNTP,结果导致脱氧核苷酸链延长的终止;二是参入dNTP,使DNA链仍可继续延长,直至参入下一个ddNTP。根据这一方法,就可得到一组以ddNTP结尾的长短不一的DNA片段。
方法是分成四组分别为ddAMP、ddGMP、ddCMP、ddTMP反应后,聚丙烯酰胺凝胶电泳按泳带可读出DNA序列。

第6题:

末端脱氧核苷酸转移酶


正确答案:是一种无需模板的DNA聚合酶,催化脱氧核苷酸结合到DNA分子的3’羟基端。

第7题:

双脱氧链末端终止法测序的基本原理是利用()。

  • A、RT-PCR
  • B、PCR
  • C、WesternBlot
  • D、SouthernBlot
  • E、水解法

正确答案:B

第8题:

酶标仪的工作原理为( )。

A.Edman降解法

B.Maxam Gilbert化学降解法

C.双脱氧链末端终止法

D.光电比色法

E.分光光度法


参考答案:E

第9题:

用于测序的DNA末端终止法中不需要()。

  • A、四种脱氧核苷酸(dNTP)
  • B、四种双脱氧核苷酸(ddNTP)
  • C、DNA聚合酶
  • D、32P标记的一种dNTP
  • E、DNA连接酶

正确答案:E

第10题:

SANGER双脱氧链终止法的原理是什么?


正确答案: DNA链中核苷酸以3’,5’-磷酸二酯键连接,合成DNA所用的底物是2’-脱氧核苷三磷酸。2’,3’ddNTP与普通dNTP不同,它们在脱氧核糖的3’位置缺少一个羟基。在DNA聚合酶作用下通过三磷酸基团掺入到延伸的DNA链中,但由于没有3’羟基,不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键,因此,正在延伸的DNA链不能继续延伸。在DNA合成反应混合物的4种普通dNTP中加入少量的一种ddNTP,链延伸将与偶然发生但却十分特异的链终止竞争,产物是一系列的核苷酸链,其长度取决于引物末端到出现过早链终止位置间的距离。在4组独立酶反应中分别采用4种不同的ddNTP,结果将产生4组寡核苷酸,它们将分别终止于模板链的A、C、G或T位置。