工学
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相似问题和答案
第1题：
离子交换层析技术主要应用( )。
A、分离和纯化蛋白
B、盐的分离
C、糖的分离
D、核酸的分离和纯化
E、水的净化
参考答案：A
第2题：
蛋白质类物质的分离纯化往往是多步骤的，其前期处理手段多采用下列哪类的方法。（）
- A、分辨率高
- B、负载量大
- C、操作简便
- D、价廉
正确答案:B
第3题：
盐析法主要用途( )。
A、蛋白的分离和纯化
B、盐的分离
C、糖的分离
D、核酸的分离和纯化
E、水的净化
正确答案：A
第4题：
（）基因工程药物的分离纯化一般不应超过5个步骤，包括（）；（）；（）；（）和（）。
正确答案:细胞破碎；固液分离；浓缩与初步纯化；高度纯化；成品加工
第5题：
蛋白类物质的分离纯化往往是多步骤的，其前期处理手段多采用下列哪类方法（）。
- A、分辨率高
- B、负载量大
- C、操作简便
- D、价廉
正确答案:B
第6题：
离子交换层析技术的主要应用
A、分离和纯化蛋白
B、分离盐类
C、分离和纯化核酸
D、分离和纯化多糖
E、净化水质
参考答案：A
第7题：
简答凝胶色谱柱分离主要步骤及操作。
正确答案: （1）凝胶的预处理
市售凝胶必须经过充分溶涨后才能使用，在烧杯中将干燥凝胶加水或缓冲液，搅拌、静置、倾去上层混悬液、除去过细的粒子。如此反复多次，直至上层澄清为止。
（2）层析柱的选择
层析柱的直径大小不影响分离度，样品用量大，可加大柱的直径。分离度取决于柱高，为分离不同组分，凝胶柱床必须有适宜的高度。
（3）凝胶柱的装填
进胶过程必须连续、均匀，不要中断，并在不断搅拌下使胶均匀沉降。
（4）样品处理和加样
分离蛋白质样品的体积为凝胶床的1-4％一般约0.5-2ml，在蛋白质溶液除盐时，样品可达凝胶床的20-30％；分级分离样品体积要小，使样品层尽可能窄，洗脱出的峰形较好。加样时尽量减少样品的稀释及凝胶床面的搅动。
（5）洗脱与收集
整个洗脱过程中始终保持一定的操作压。流速不宜太快且要稳定。
第8题：
可以抑制DNA酶活性的措施是
A、使用EDTA抗凝剂
B、使用枸橼酸盐抗凝剂
C、尽量缩短提取时间
D、尽量简化分离纯化步骤
E、低温下操作
参考答案：ABE
第9题：
用菌组织分离制母钟的主要操作步骤？
正确答案: 1）选择优良新鲜菇体；
2）环境用具严格消毒，进行无菌操作；
3）菇体表面严格消毒；
4）菌内组织块分离，经纵切、横切分离切取菌肉0.5cm2小块；
5）在无菌条件下，将切下的小块用接种针挑放到培养基上；
6）培养，置适宜温度下培养7-14天，菌丝长满试管斜面即可。
第10题：
试回答蛋白质串联亲和纯化分离原理、方法及步骤。
正确答案: 串联亲和纯化（TAP），用于研究蛋白质在生理条件下的相互作用，通过嵌入一段蛋白质标记，在目的蛋白的一端或中部导入蛋白质标记，这样便在没有破坏目的蛋白调控序列的基础上，使得被标记的目标蛋白其表达量与其在细胞中自然表达水平相当，避免了由于过量表达的导致非自然条件下的蛋白质相互作用。经过特异性的两步亲和纯化，在生理条件下与目标蛋白发生真实作用的蛋白便可被一起洗脱下来，这样得到的蛋白质复合体接着可以用质谱技术或Edman降解法进行鉴定。
方法及步骤：
（1）蛋白质标记：由蛋白A的IgG结合区（ProtA）和钙调蛋白结合区（CBP）构成，中间被一个TEV蛋白酶的酶切位点隔开；
（2）构建表达标记蛋白的细胞或组织：将编码蛋白质标记的基因片段导入目标蛋白质编码基因的特定部位；
（3）细胞抽提物的准备；
（4）串联亲和纯化；
（5）蛋白质复合体的鉴定。