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问答题某一质粒载体具有 Tetr和 Kanr的表型，在 Kan抗性基因内有一 Bgl I的切点。现用 Bgl I切割该载体进行基因克隆，问：（1）转化后涂皿时应加什么样的抗生素？（2）培养后长出的菌落具有什么样的抗性基因型？（3）如何利用抗性变化筛选到含有插入片段的重组体？
题目
参考答案和解析
（2）TetrKans和TetrKanr；
（3）重新点种在含Tet、Kan和只加Tet的平板上，选择只在Tet平板上生长的菌落，即为所需的重组体。
相似问题和答案
第1题：
下列对DNA克隆操作的描述哪一项是错误的
A．限制性内切酶在特定的位置上切割质粒和供体DNA分子
B．载体DNA和供体DNA在连接酶的作用下末端相连形成重组1DNA
C．除质粒外，λ噬菌体可作为重组DNA的载体
D．筛选含重组DNA的细菌通常可根据载体对抗生素的抗性来进行
E．以质粒为载体构建的重组DNA分子引入宿主细胞时需与宿主DNA结合
第2题：
下列载体哪一个是一种天然的极好的基因工程载体（）
- A、质粒
- B、黏性质粒载体
- C、Ti质粒
- D、噬菌体载体
正确答案:C
第3题：
pBR322质粒载体的描述中，错误的是 ( )
A、只有一个复制起始位点
B、具有两个抗生素抗性基因
C、抗性基因中有抗四环素基因
D、具有较小的分子量
E、具有较高的拷贝数
第4题：
对理想的克隆载体特性的叙述，错误的是（）。
- A、分子量小、多拷贝、紧密控制型
- B、具有多种常用的限制性内切酶的单切点
- C、能插入较大的外源DNA片段
- D、具有容易操作的检测表型
- E、常用的质粒载体大小一般在1～10kb
正确答案:A
第5题：
下列哪项不是质粒被选为基因运载体的理由（）
- A、能进行自我复制
- B、DNA为环状
- C、有多个限制酶切点
- D、具有标记基因
正确答案:B
第6题：
(Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因)。有人将此质粒载体用BamH I酶切后,与用BamH I酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌。结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题：
(1)质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有____(答出两点即可)。而作为基因表达载体，除满足上述基本条件外，还需具有启动子和终止子。
(2)如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述三种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的，其原因是____；并且含有质粒载体和含有插入了目的基因的重组质粒的细胞也是不能区分的，其原因是____。在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落，还需使用含有____的固体培养基。
(3)基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体，其DNA复制所需的原料来自____。
(3)受体细胞
解析：(1)质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有：能够自我复制、具有标记基因、具有一个至多个限制酶切割位点等。
(2)依题意可知，目的基因插入位点在Tetr中，导致四环素抗性基因(TEtr)失活，而氨苄青霉素抗性基因(Ampr)仍能行使正常功能。如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞,因二者均不含氨苄青霉素抗性基因,在该培养基上都不能生长,所以是不能区分的；含有质粒载体和含有插入了目的基因的重组质粒的细胞，因二者都含氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上都能生长,因此也是不能区分的。在上述筛选的基础上,若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落,还需使用含有四环素的固体培养基；因目的基因插入后，导致四环素抗性基因失活，含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌在该培养基中不能生长，而含有质粒载体的则能正常生长。
(3)噬菌体是专性在细菌细胞中寄生的细菌病毒。在侵染细菌时，噬菌体的DNA进入到细菌细胞中，而其蛋白质外壳留在细胞外；在噬菌体DNA的指导下，利用细菌细胞中的物质和能量合成噬菌体的组成成分。其DNA复制所需的原料来自宿主(受体)细胞，即大肠杆菌。
第7题：
根据基因工程的有关知识，回答下列问题：质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下：AATTC……GG……CTTAA为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是（）。
正确答案:切割产生的DNA片段末端与EcoRⅠ切割产生的相同
第8题：
基因组较大的生物进行基因组测序时最常用的基因组文库载体是( )
A、质粒载体
B、噬菌体载体
C、BAC
D、YAC
E、黏粒载体
第9题：
ColEl是惟一用作基因工程载体的自然质粒，这种质粒（）
- A、是松弛复制型
- B、具有，四环素抗性
- C、能被氯霉素扩增
- D、能产生肠杆菌素
正确答案:A,D
第10题：
下列关于载体的叙述中，错误的是（）
- A、与目的基因结合后，实质上就是一个重组DNA分子
- B、对某种限制酶而言，最好只有一个切点，但还要有其他多种限制酶的切点
- C、目前常用的有质粒、噬菌体和动、植物病毒等
- D、具有某些标记基因，便于对其进行切割
正确答案:D