医学

问答题简述变性高效液相色谱法检测基因变异的优点。

题目
问答题
简述变性高效液相色谱法检测基因变异的优点。
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相似问题和答案

第1题:

变性高效液相色谱法


正确答案: DHPLC的填料由一个具有惰性物化性质的固定相和PS-DVB微孔球共价连接而成,采用具有疏水性的又带正电荷的TEAA作为“桥分子”,使DNA片段能够被吸附在固定相上。DHPLC的流动相为有机溶剂乙氰,双链DNA分子被吸附在固定相上,通过改变流动相中乙氰的浓度,不同片段长度的DNA分子被逐步洗脱,从而实现DNA片段的分离。洗脱下来的DNA片段一般通过紫外检测,波长254nm,而不需要进行费时的凝胶电泳分析。
当柱温<50℃时,根据双链DNA分子的链长度来的分离。当70℃>柱温>50℃时,根据双链分子的序列进行分离,这时可用于杂合双链分子与纯合双链分子的分离。当柱温>70℃时,依据单链DNA分子的碱基组成和片段长短进行分离。

第2题:

高效液相色谱法常用的固定相是()

  • A、气相色谱法
  • B、高效液相色谱法
  • C、甲醇-水或乙腈-水
  • D、紫外检测器
  • E、十八烷基硅烷键合硅胶(OCS)

正确答案:E

第3题:

国标规定,粮,油,菜中西维因残留量的测定可以用高效液相色谱法,请问用高效液相色谱法测定西维因时,是用何种检测器测定的

A、紫外检测器

B、示差折光检测器

C、光导检测器

D、电导检测器

E、荧光检测器


参考答案:A

第4题:

高效液相色谱法中最常见的检测器有()

  • A、UV
  • B、FLD
  • C、ECD
  • D、ELSD

正确答案:A,B,D

第5题:

高效液相色谱法常用的检测器是氢火焰离子化检测器。


正确答案:错误

第6题:

简述变性高效液相色谱法检测基因变异的优点。


正确答案: DHPLC突变检测技术与其它方法相比,具有更高的准确性和敏感性。
(1)DHPLC与各种电泳法的比较SSCP分析片段长度<300 bp,对于人类SNP的检出率为50~95%,尤其容易漏检位于发夹结构中的变异。CSGE检测杂合子的灵敏度与SSCP相当或稍低。而DHPLC对150bp~600bp的DNA片段的突变检出率都可达到100%,且而不需要特殊的样本处理。TGGE/DGGE对于异源双链及同源双链分子的检测灵敏度高出CSGE和SSCP很多。但对于较高温度的融解区域的突变检测,DHPLC的灵敏度要高于TGGE/DGGE。
(2)DHPLC与DNA测序的比较 对于频率高于20%的变异,直接测序的检出率为80%,DHPLC的检出率可达到100%;基因突变频率低于20%时就很难用测序方法检测到,而DHPLC可从待检样品中检测到占总基因量0.5-5%的突变等位基因,且重现性很好。

第7题:

高效液相色谱法中,系统适用性试验通常包括哪几个检测指标?


正确答案:通常包括理论板数、分离度、重复性和拖尾因子等四个指标。

第8题:

简述高效液相色谱法定性鉴别的依据。


参考答案:主要利用保留值进行定性,多用已知对照品作为定性鉴别依据。

第9题:

简述正相高效液相色谱法和反相高效液相色谱法的适用性。


正确答案: 正相高效液相色谱法是指流动相的极性小于固定相极性的高效液相色谱法,主要用于溶于有机溶剂的极性和中等极性物质的分离分析,如糖类、氨基酸等;反相高效液相色谱法是指流动相的极性大于固定相极性的高效液相色谱法,主要用于溶于非极性至中等极性物质的分离分析,如黄酮类、生物碱等。

第10题:

用高效液相色谱法分析维生素,常用的检测器是()。


正确答案:紫外光度检测器