临床医学检验

问答题简述Maxam-Gilert化学降解法测DNA序列的原理。

题目
问答题
简述Maxam-Gilert化学降解法测DNA序列的原理。
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相似问题和答案

第1题:

简述化学法测定DNA序列的基本原理。


正确答案:化学法是对待测DNA进行化学降解。在化学法的测序系统中,先对待测DNA末端进行放射性标记,然后分成4组或5组互为独立的化学反应体系,每一组用不同的化学试剂特异地针对某一种或某一类碱基进行化学切割,通过化学降解后产生长短不一的DNA片段,其长度取决于改组反应所针对的碱基在待测DNA片断中的位置,将各组反应产物通过高分辨率的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,放射自显影检测后直接识读待测DNA的序列。

第2题:

有关化学降解法测序描述正确的是()。

  • A、借助于双脱氧末端终止法
  • B、进行了DNA的延伸
  • C、进行了碱基的特异修饰和化学降解
  • D、序列上每个碱基都须标记
  • E、电泳分离步骤可省略

正确答案:C

第3题:

DNA序列测定中的化学降解法由谁提出 ( )

A、Sanger

B、Maxam和Gilbert

C、Dower

D、DulbeccoR

E、K.Mullis


参考答案:B

第4题:

简述速率法测尿素(urea)的测定原理。


正确答案: 尿素在脲酶的作用下,水解生成氨和二氧化碳。氨在α-酮戊二酸和还原型辅酶Ⅰ存在下,经谷氨酸脱羟酶(GLDH)催化生成谷氨酸。同时,还原型辅酶Ⅰ被氧化成氧化型辅酶Ⅰ。还原型辅酶Ⅰ在340nm波长处有吸收峰,其吸光度下降的速率与待测样品中尿素含量成正比。

第5题:

合成终止法测DNA序列时,不用的DNA聚合酶是()。

  • A、DNA聚合酶I
  • B、DNA聚合酶II
  • C、TaqDNA聚合酶
  • D、Klenow片段
  • E、测序酶

正确答案:B

第6题:

简述链末端终止法测定DNA序列的原理。


正确答案:利用DNA聚合酶,以待测单链DNA为模板,以dNTP为底物,设立四种相互独立的测序反应体系,在每个反应体系中加入不同的双脱氧核苷三磷酸(dideoxyribonucleoside triphosphate,ddNTP)作为链延伸终止剂,在测序引物引导下,按照碱基配对原则,每个反应体系中合成一系列长短不一的引物延伸链,通过高分辨率的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,放射自显影检测后,从凝胶底部到顶部按5′→3′方向读出新合成链序列,由此推知待测模板链的序列。

第7题:

链末端终止法是目前最通用的DNA测序技术,应掌握其基本原理、主要步骤和体系组成,并熟悉其特点。对于未知序列测序,链末端终止法的测序引物为()

  • A、其亚克隆载体序列的随机引物
  • B、其亚克隆载体序列的定向引物
  • C、其亚克隆载体序列的待测引物
  • D、其亚克隆载体序列的通用引物
  • E、其亚克隆载体序列的双链引物

正确答案:D

第8题:

化学降解法测定的序列是

A、DNA原分子

B、DNA的酶促反应产物

C、DNA的末端序列

D、DNA的中间序列

E、DNA的降解序列


参考答案:A

第9题:

双脱氧合成终止法测DNA序列时,加A体系中所得到的DNA片段都是以哪个核苷酸结尾()。

  • A、A
  • B、C
  • C、G
  • D、T
  • E、U

正确答案:A

第10题:

简述“永停”法测水份的原理?


正确答案:在浸入溶液中的两铂电极间加1.5V左右的电压,用微安计测量微电流,若溶液中有水存在时,则阴极极化,两极间无电流通过;当滴定至终点时,溶液中同时有I2/2I-电子对存在,则阴极去极化,溶液导电,电流突然增大到最大值并稳定30S以上,此即为终点。