生物学

简述PCR的操作步骤。

题目

简述PCR的操作步骤。

参考答案和解析
正确答案: 标准的PCR过程分为三步:
D.NA变性:(90℃-96℃)双链DNA模板在热作用下,氢键断裂,形成单链DNA
退火:(25℃-65℃)系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部双链。
延伸:(70℃-75℃)在Taq酶(在72℃左右,活性最佳)的作用下,以dNTP为原料,从引物的3′端→5′端延伸,合成与模板互补的DNA链。
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相似问题和答案

第1题:

简述停机的操作步骤。


参考答案:1 接值长停机命令,应与相关岗位人员作好联系,准备停机。
2 确认汽轮发电机组一次调频回路处于功率反馈回路。
3 试开交流润滑油泵、直流润滑油泵、盘车电动机空载运行正常;并投入联锁。
4 机组降负荷速率一般设定在300Kw/min,若机组将进行检修需停用较长时间,则降负荷速率设定相应低一些。
5 在减负荷过程中,应严格监视控制汽缸金属降温速度不超过3℃/min,密切监视机组的绝对膨胀,振动等情况。
6 停用一、二抽应在减负荷过程中进行,当机组一、二抽流量分别到零后,分别关闭一、二抽隔离门,开启一、二抽液压止回阀底部疏水门。视具体情况投入相应的减温减压器,保证厂用蒸汽正常。
7 根据凝汽器热水井水位调整凝结水再循环门,逐渐减少送除氧器水量直至关闭凝结水至除氧器进水调节门。注意调整除氧器压力、水位。
8 根据机组润滑油油温、发电机进口风温调整冷油器、发电机空冷器循环水出水门。
9 加强轴封系统的监视和调整。
10 解除除低油压以外的所有保护。
11 将负荷减至零,由电气将发电机解列。
12 发电机解列后,汽轮机调节控制系统应能维持空负荷运行。(若转速迅速上升,应立即手动脱扣并关闭电动主汽门。)
13 开启交流润滑油泵,按手拍危急遮断器,查自动主汽、调节汽门和抽汽液控逆止门关闭、关闭机组电动主汽门(其旁路门应关闭中),检查转速下降。
14 开启机组本体疏水门。
15 停用真空泵抽真空系统,凝汽器真空逐渐下降。
16 调整均压箱压力。
17 开启机组电动主汽门后疏水至疏水母管隔离门、调整门,待机组电动主汽门后压力到零,关闭机组电动主汽门后疏水至疏水母管隔离门、调整门,开启机组电动主汽门后防腐汽门。(在对机组电动主汽门后管道泄压时,应对相关阀门进行检查,以防压力蒸汽倒入。)
18 凝汽器真空到零,停用轴封均压箱供汽及轴封加热器。确保真空与转速同时到零。
19 转子惰走结束记录转子惰走时间,投入盘车装置,投盘车连锁,记录盘车电流,倾听汽轮机内部无异声。
20 发电机进风温度低于40℃,停用发电机空冷器。
21 轴承进油温度低于35℃,停用冷油器水侧。
22 当机组排汽温度降至50℃以下时,关闭凝汽器循环水出水门,汇报值长,调整循环水泵运行方式。
23 待上汽缸金属温度低于120℃后,可停用连续盘车改用间断盘车,汽缸金属温度低于80℃后,可以停交流润滑油泵。

第2题:

简述PCR的步骤。PCR是如何使得特异性DNA片段以几何级数倍增的?


正确答案: PCR分三步:
①双链模板DNA变性。双链解开成单链。
②退火。
即引物与单链DNA两端互补序列配对,形成DNA聚合反应中的模板与引物的关系。没有引物的帮助,所有的DNA聚合酶都无能力从头合成一条新链。
③链的延伸。
DNA聚合酶从引物3’-OH端开始进行聚合酶反应,直至完全产生两条互补的新链。
三个反应阶段结束后,又可以开始下一次的循环,引物链的延伸产物与原来的模板DNA经加热变性后,也作为模板DNA和另一个引物互补,在DNA聚合酶作用下又发生引物链的延伸反应。这样反复循环数十次,可使特异性DNA片段以几何级数倍增。

第3题:

简述扩增片段限制长度多态性(PCR-RFLP)三个步骤。


本题答案:1.先用PCR技术扩增含有序列差异的待测DNA片段。
2.根据靶片段序列特点,选用合适的限制序列特点,选用合适的限制酶切PCR产物。
3.运用凝胶电泳分离酶切割产物,根据片段的数量和片段长度判定等位基因和基因型。

第4题:

简述卸车操作步骤。


正确答案: (1)给槽车增压,将槽车压力增高至储罐压力加0.2Mpa;
(2)确认槽车压力达规定后,关闭气液相连通阀,正确开启进液阀门;
(3)观察进液管,如结霜并有流液声,表示卸车正常;如接头等泄露,立即停止卸车操作,排除险情;
(4)观察槽车及储罐的压力及液位变化情况,通过储罐的减压及槽车增压操作,保持压差在0.2Mpa左右;
(5)待液化天然气卸完后,关闭液相管进口阀门及储罐进口切断阀前阀门,打开上部进液阀;
(6)给槽车降压,将槽车气相管接到卸车台气相管上,将槽车内气体送到储罐或外输管线,当槽车内压力降到0.3Mpa时,应停止操作。

第5题:

简述PCR原理及其基本反应步骤。


正确答案:PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:
①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;
②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;
③引物的延伸:DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板互补的DNA链。

第6题:

在便携式荧光PCR操作中,可以一次性地回溶所有冷冻干燥管中的PCR组分试剂并冷藏保存,这样下次再用的时候就不需要重复回溶步骤了。()


正确答案:错误

第7题:

简述PCR扩增仪的操作规程。


正确答案: 普通PCR扩增仪的操作通常为打开电源,仪器自检,设置温度程序或调出储存的程序,运行即可。定量PCR扩增仪的操作一般都是先打开PCR仪电源,再打开相连电脑中的相应软件,分别设置温度程序、采集通道,并可根据不同仪器的要求进行一些特殊设置,在仪器中放好PCR管,盖好仪器,运行设置还的反应程序。关机是通常先关软件,再关PCR仪,最后关电脑。

第8题:

简述故障停机操作步骤。


参考答案:1 手拍危急遮断器或按下盘上停机按钮,检查自动主汽门、调速汽门、各抽汽逆止门、电动门关闭。
2 由电气解列发电机。
3 开启高压电动油泵
4均压箱向投新蒸汽
5 完成其它停机操作。
6 记录并比较惰走时间。

第9题:

何谓PCR,包括哪些步骤?


正确答案: PCR即聚合酶链反应,是一种特异性的体外DNA序列扩增技术,即以目的基因为模板,在寡核苷酸引物和4种脱氧核糖核酸存在的条件下,依赖DNA聚合酶的酶促合成反应。
PCR包括3个步骤:
①变性:通过加热使DNA双螺旋结构解离成单链DNA。
②退火:在变性后突然使温度降低,使引物与其互补的模板形成杂交链:
③延伸:在DNA聚合酶和4种脱氧核糖核酸及Mg2+存在的条件下,耐热的DNA聚合酶催化以引物为起点的DNA链的延伸。如此三步形成一个循环,每一次循环的产物又和原始模板一起作为下一个循环的模板。因此目的DNA产物是以几何级数增长的。

第10题:

简述操作步骤。


正确答案: (1)识别目标客户
(2)认识目标客户
(3)从目标客户的角度出发,为其提供体验
(4)确认体验的具体参数
(5)让目标对象进行体验
(6)进行评价与控制