临床医学检验

问答题简述随机PCR实验步骤。

题目
问答题
简述随机PCR实验步骤。
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相似问题和答案

第1题:

实验法一般按以下几个步骤操作:( )。

A.挑选实验对象

B.建立实验组和对照组

C.进行实验观察

D.分析实验结果

E.随机配对


正确答案:ABCD

第2题:

简述PCR原理及其基本反应步骤。


正确答案:PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:
①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;
②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;
③引物的延伸:DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板互补的DNA链。

第3题:

简述精液(斑)的实验室检验的步骤。


参考答案:

1.肉眼检查
2.初步试验
3.确证试验
4.个人识别


第4题:

简述霍桑实验的步骤。


正确答案: (1)1924-1927年进行的工作物理环境实验。
(2)1927-1932年进行的职工福利措施实验。
(3)1928—1930年进行的态度和意见调查。
(4)1930-1932年进行的团体行为的观察研究。

第5题:

简述借用随机数码表简单随机抽样的步骤。


正确答案:⑴总体的所有元素进行编号,一般以0号或者1号开始。
⑵据最大编号的位数确定随机数码的使用位数,在随机数码表中任意指定一个起始数并且报告这个起始数在表中的确切位置,并规定使用随机数码第几列到第几列的位数。
⑶从上到下或其他明确顺序,抄录随机数表中不大于总体最大编号的所有随机数,直到抄满个数等于入样元素数。
⑷抄录的数码从总体中将对应元素取出组成所需样本。

第6题:

简述PCR的步骤。PCR是如何使得特异性DNA片段以几何级数倍增的?


正确答案: PCR分三步:
①双链模板DNA变性。双链解开成单链。
②退火。
即引物与单链DNA两端互补序列配对,形成DNA聚合反应中的模板与引物的关系。没有引物的帮助,所有的DNA聚合酶都无能力从头合成一条新链。
③链的延伸。
DNA聚合酶从引物3’-OH端开始进行聚合酶反应,直至完全产生两条互补的新链。
三个反应阶段结束后,又可以开始下一次的循环,引物链的延伸产物与原来的模板DNA经加热变性后,也作为模板DNA和另一个引物互补,在DNA聚合酶作用下又发生引物链的延伸反应。这样反复循环数十次,可使特异性DNA片段以几何级数倍增。

第7题:

何谓PCR,包括哪些步骤?


正确答案: PCR即聚合酶链反应,是一种特异性的体外DNA序列扩增技术,即以目的基因为模板,在寡核苷酸引物和4种脱氧核糖核酸存在的条件下,依赖DNA聚合酶的酶促合成反应。
PCR包括3个步骤:
①变性:通过加热使DNA双螺旋结构解离成单链DNA。
②退火:在变性后突然使温度降低,使引物与其互补的模板形成杂交链:
③延伸:在DNA聚合酶和4种脱氧核糖核酸及Mg2+存在的条件下,耐热的DNA聚合酶催化以引物为起点的DNA链的延伸。如此三步形成一个循环,每一次循环的产物又和原始模板一起作为下一个循环的模板。因此目的DNA产物是以几何级数增长的。

第8题:

简述扩增片段限制长度多态性(PCR-RFLP)三个步骤。


本题答案:1.先用PCR技术扩增含有序列差异的待测DNA片段。
2.根据靶片段序列特点,选用合适的限制序列特点,选用合适的限制酶切PCR产物。
3.运用凝胶电泳分离酶切割产物,根据片段的数量和片段长度判定等位基因和基因型。

第9题:

简述PCR的操作步骤。


正确答案: 标准的PCR过程分为三步:
D.NA变性:(90℃-96℃)双链DNA模板在热作用下,氢键断裂,形成单链DNA
退火:(25℃-65℃)系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部双链。
延伸:(70℃-75℃)在Taq酶(在72℃左右,活性最佳)的作用下,以dNTP为原料,从引物的3′端→5′端延伸,合成与模板互补的DNA链。

第10题:

简述酸性高锰酸钾法实验的步骤。


正确答案: 1.取100mL水样(原样或经稀释)置于锥形瓶中,加入5mLH2SO4溶液(1+1)混合均匀;
2.加入10mL高锰酸钾标准溶液[c(1/5KMnO4)=0.1mol/L],置于沸水浴中加热30min,取出冷却至室温;
3.加入10mL草酸钠标准溶液[c(1/2Na2C2O4)=0.01mol/L],使溶液中的红色褪尽;
4.用高锰酸钾标准溶液[c(1/5KMnO4)=0.1mol/L]滴定,直至出现微红色。
测定过程:
①取水样100mL(原样或经稀释)于锥形瓶中{(1十3)H2SO45mL}
②混匀(0.0lmol/L高锰酸钾标液(1/5KMn04)10.0mL)
③沸水浴30min(0.0lmol/L草酸钠标液(1/2Na2C2O4)l0.0mL)
④退色(0.01mol/LKMn04标液回滴)
⑤终点微红色
注意事项:沸水浴的液面应高于溶液液面;水浴完毕后,溶液仍应保持淡红色,如变浅或全部褪去,说明高锰酸钾用量不够。此时,应将水样稀释倍数加大后在测定。