食品科学技术
什么是革兰氏染色法？其基本原理及操作步骤怎样？
题目
什么是革兰氏染色法？其基本原理及操作步骤怎样？
参考答案和解析
正确答案:
1884年，丹麦医生革兰氏（Gram）发明了一种重要的细菌鉴别染色法称革兰氏染色法（Gramstain）。该染色法的步骤是：（1）先用结晶紫液初染；（2）再用碘液媒染（与结晶紫形成不溶于水的复合物）；（3）接着用95%乙醇进行脱色；（4）最后再用番红（沙黄）液复染。经过这种染色方法可以将所有细菌基本上区分为两大类：革兰氏阳性细菌（GrampositivebacteriA.：原经（1）（2）步已染上的紫色复合物不被乙醇洗脱仍保持紫色，称革兰氏阳性（G+）。革兰氏阴性细菌（GramnegativebacteriA.：原已染上的紫色复合物易被乙醇洗脱，又变成无色菌体最后则被番红复染而呈红色，称革兰氏阴性（G—）。革兰氏染色反应机理：一般认为，革兰氏阳性细菌细胞壁较厚而紧密，肽聚糖网层次多、交联致密，不含类脂质。当用乙醇脱色时，因失水而引起肽聚糖层网格结构的孔径缩小乃至关闭，阻止了结晶紫—碘复合物的洗脱，故菌体最后仍呈紫色或紫红色；相反，革兰氏阴性细菌因其细胞壁薄，外膜层的类脂含量高，而肽聚糖层薄和交联度差，当乙醇脱色时，外膜层的物质迅速被溶解，通透性增大，结晶紫—碘复合物被抽提洗脱，细胞褪成无色，再经沙黄等红色染料复染，结果阴性菌呈现红色。
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相似问题和答案
第1题：
革兰氏染色的关键操作步骤是什么？
正确答案: （1）结晶紫染色
（2）碘液固定
（3）酒精脱色
（4）复染
第2题：
试以枯草芽孢杆菌为例，简述采用革兰氏染色法染色的结果、原理及其主要操作步骤。
正确答案: 结果：G+，菌体呈蓝紫色。
原理：G+细菌细胞壁中肽聚糖含量高，而脂类物质含量低，且肽聚糖层网状结构紧密、牢固、多层。当用乙醇处理时，脂类物质溶解而使得肽聚糖层网状结构中的孔径变小，细胞壁通透性降低，结晶紫-碘的复合物保留于细胞中而不易脱色，故菌体仍呈结晶紫-碘复合物的颜色（蓝紫色）。
主要操作步骤：涂片：将培养一定时间的菌种均匀涂布于载玻片上，干燥、固定。染色：结晶紫碘液95％乙醇沙黄。（初染）（媒染）（脱色）（复染）油镜观察。
第3题：
什么是革兰氏染色法？该方法有何用途？
正确答案:革兰氏染色法：细菌先经碱性染料结晶染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，脱色后再用碱性蕃红进行复染（阳性紫色G＋，阴性红色G－）。
用途：细菌鉴别分类的重要依据
第4题：
试以大肠杆菌为例，简述采用革兰氏染色法染色的结果、原理及主要操作步骤。
正确答案: 结果：G-，菌体呈复染液颜色（红色）原理：G-菌细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类物质含量高。当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁通透性增加，致使结晶紫-碘的复合物被抽出，最后被染上了复染液（沙黄或番红）的颜色（红色）。主要操作步骤：涂片：培养一定时间的菌种均匀涂布于载玻片上，干燥、固定；染色：结晶紫初染碘液媒染95％乙醇脱色沙黄或番红复染；油镜观察。
第5题：
革兰氏染色法染色步骤包括（）
正确答案:结晶紫初染、碘液媒染、95%乙醇脱色、稀释复红或沙黄复染
第6题：
革兰氏染色法染色步骤包括（）、（）、（）和（）。
正确答案:结晶紫初染；碘液媒染；95%乙醇脱色；稀释复红或沙黄复染
第7题：
革兰氏染色法的关键步骤是什么？为什么？
正确答案: 95%酒精脱色是关键步骤，酒精具有脱色、溶脂、蛋白凝固的功能，革兰氏阳性菌胞壁主要是粘肽（蛋白）遇浓酒精凝固变性成厚壳，而阻止酒精内渗，故不能脱出前步的染色，故呈紫色；革兰氏阴性菌胞壁主要是脂类及多糖，遇浓酒精溶脂，胞壁遭破坏，酒精内渗，完全脱出前步的染色，复染后呈红色.
第8题：
石炭酸复红加温染色是革兰氏染色法的初染步骤。
正确答案:错误
第9题：
何谓革兰氏染色法？主要操作步骤各有何作用？其中哪一步是成败的关键？为什么？
正确答案: 此法由丹麦医生C.Gram于1884年发明的一种重要的细菌鉴别染色法而得名。主要步骤：结晶紫初染，碘液媒染，乙醇脱色和沙黄复染。初染使菌体染上紫色；媒染使结晶紫与碘分子结合成一个分子量大且染色较牢固的复合物；乙醇脱色是使已染上的蓝紫色脱去而又成为无色（若是G+菌则仍为蓝紫色）；复染是使已脱色的细菌再染上复染液的颜色。此法成败的关键是脱色。如果脱色时间过长，G+菌则可被误染为G-菌，反之，G-菌可被误染为G+菌。
第10题：
什么是革兰氏染色法？它的主要步骤是什么？哪一步是关键？
正确答案: 革兰氏染色法是细菌细胞的复合染色法，由丹麦医生Hans Christian Gram于1884年创立。
主要步骤：涂片固定、结晶紫初染、碘液媒染、95%乙醇脱色、番红复染。
关键：95%乙醇脱色