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如何提高克隆基因的表达水平？
题目
如何提高克隆基因的表达水平？
参考答案和解析
正确答案:
1）、表达载体的优化设计；
2）、提高目标基因mRNA和目标基因产物的稳定性；
3）、密码子偏爱性；
4）、表达环境条件的优化。
2）、提高目标基因mRNA和目标基因产物的稳定性；
3）、密码子偏爱性；
4）、表达环境条件的优化。
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相似问题和答案
第1题：
如何实现疾病基因的克隆？
正确答案:基因克隆通常指将目的基因插入到某载体内，利用载体在宿主细胞中大量繁殖以获得足够量的拷贝，从而进行基因结构和功能的分析。基因克隆即是在体外通过人工剪、接，将不同来源的DNA分子组成一个重组体，然后插入宿主细胞进行扩增或表达，通常包括以下几个步骤：
①目的基因的提取：供体生物基因或称外源基因的提取；
②限制性酶切：目的基因切成不同大小的片段
③酶接：连接到另一个DNA分子上（克隆载体）
④转化：将这个重组DNA分子转入到受体细胞
⑤筛选和鉴定：对吸收了重组DNA的受体细胞进行筛选和鉴定
⑥基因表达：对含有重组DNA的细胞进行大量培养，检测外源基因是否表达。
第2题：
下列哪项不是分子克隆的主要步骤（）
- A、目的基因的表达
- B、基因文库的建立
- C、目的基因的筛选
- D、目的基因的分析
正确答案:A
第3题：
为了减轻工程菌代谢负荷,提高外源基因表达水平可采取什么措施?
参考答案：将宿主细胞生长和外源基因的表达分成两个阶段。
第4题：
为什么用原核表达系统表达真核生物的蛋白质时，克隆的真核基因不能来自基因组文库？真核基因应如何获得？
正确答案: 对真核细胞来说，从基因组DNA文库获得的基因与从cDNA文库获得的不同，基因组DNA文库所含的是带有含子和外显子的基因组基因，而从cDNA文库中获得的是已经过剪接、去除了内含子的cDNA。因为原核细胞不具有mRNA转录后加工系统，不能进行剪接、去除内含子等操作，所以
用原核表达系统表达真核生物的蛋白质时，克隆的真核基因不能来自基因组文库，应从cDNA文库中获得，或者通过提取mRNA后RT-PCR方法获得。
第5题：
如何提高转基因的表达水平。
正确答案: 实现外源基因高效表达的种种途径包括：启动子的选择和改造；目的基因的改造；构建含有核基质结合区的表达载体；建立位点特异重组体系；利用细胞器定位信号和采用叶绿体进行转化等。
1.启动子是决定外源基因转录效率的关键因素，选择合适的启动子对于增强外源基因的表达量至关重要。
2.对于微生物或动物来源的基因由于表达机制的不同，在高等植物中往往表达效果不理想，这时如果在不改变氨基酸序列的前提下通过人工改造或重新合成，使之适于在植物体内表达，就可以大大提高有效蛋白的表达量。
3.目前，采用基因枪或农杆菌法导入的外源基因在宿主染色体上的整合大多是随机发生的，如外源基因整合在转录活跃的常染色质可能得到较好的表达。但高等植物的绝大多数细胞在特定阶段有90%以上的基因在转录上是不活跃的，插入到这部分染色质区的转基因其表达活性则会大大下降，甚至出现沉默。这时如果我们能建立位点特异的重组系统则可克服这一难题。
外源基因在植物组织细胞中表达时，其表达产物受细胞中大量蛋白酶的作用而降解，造成外源蛋白积累量的减少。因此，采取措施保护外源蛋白不受降解是实现转基因成功的重要一环。以植物抗虫基因工程为例，增加外源抗虫物质在植物细胞内的稳定性可有效提高转基因植物的抗虫效果。
4.叶绿体基因拷贝数大，为实现外源基因的超量表达提供了前提；可以定点整合方式导入外源基因从而消除位置效应和转基因沉默；具原核表达方式，可直接表达来自于原核生物的基因，且能以多顺反子的形式表达多个基因。这些都使叶绿体转化系统极具提高转基因表达的潜能。
第6题：
转基因克隆猪已经在我国培育成功。研究组首先从猪胎儿皮肤中分离出纤维细胞，进行体外培育。通过电穿孔的方法将构建好的基因表达载体转入纤维细胞，经筛选后将基因纤维细胞进行体细胞克隆。接着，将重组胚胎移入代孕母猪体内，最终获得转基因克隆猪。请回答：筛选转基因细胞时，需要利用基因表达载体中（）的作用。
正确答案:标记基因
第7题：
与SLE有关（）
- A、FasL表达
- B、Fas表达
- C、FasL基因突变
- D、特异性淋巴细胞克隆下降
正确答案:C
第8题：
PCR及其衍生技术主要应用于
A.基因的体外突变
B.目的基因克隆
C. DNA序列分析
D.基因表达检测
B.目的基因克隆
C. DNA序列分析
D.基因表达检测
答案：A,B,C,D
解析：
生化P408。PCR技术的主要用途有：目的基因克隆、基因的体外突变、DNA和 RNA的微量分析、DNA序列测定和基因突变分析等。
第9题：
克隆基因目的蛋白的表达的形式主要有哪些类型？
正确答案: 表达蛋白按溶解特性通常包括：不溶性蛋白和可溶性蛋白两类，具体包括如下几种结构形态：包涵体型蛋白、融合型蛋白、分泌型蛋白
第10题：
如何有效地提高外源基因的表达效率？
正确答案: ⑴提高启动子强度
⑵缩短启动子同克隆基因间距离
⑶高效的翻译起始序列
⑷高效的转录终止区
⑸提高质粒拷贝数及稳定性
⑹用以下方法提高翻译水平：
①调整SD序列与AUG间的距离
②用点突变的方法改变某些碱基
③增加mRNA的稳定性的
⑺减轻细胞的代谢负荷：
①诱导表达
②表达载体的诱导复制
⑻提高表达蛋白的稳定性，防止其降解：
①克隆一段原核序列，表达融合蛋白
②采用某种突变菌株
③表达分泌蛋白质