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小量制备质粒DNA，用质粒中特定的酶切发现切割不动，试分析可能原因及克服方法？

题目

小量制备质粒DNA，用质粒中特定的酶切发现切割不动，试分析可能原因及克服方法？

参考答案和解析
正确答案: 最可能的原因：从细菌沉淀或从核酸沉淀中吸上清时注意不够，带了杂蛋白。其最根本的原因是因为细菌的细胞壁成分或核内某些蛋白质可能抑制限制酶活性。克服方法：用酚氯仿对溶液抽提；用离心柱层析法纯化DNA。
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相似问题和答案

第1题：

基因重组工程技术中不需要下列哪种工具()

A、载体(质粒，病毒)

B、限制性内切酶

C、DNA连接酶

D、DNA聚合酶


参考答案：A

第2题：

下列对DNA克隆操作的描述哪一项是错误的

A．限制性内切酶在特定的位置上切割质粒和供体DNA分子

B．载体DNA和供体DNA在连接酶的作用下末端相连形成重组1DNA

C．除质粒外，λ噬菌体可作为重组DNA的载体

D．筛选含重组DNA的细菌通常可根据载体对抗生素的抗性来进行

E．以质粒为载体构建的重组DNA分子引入宿主细胞时需与宿主DNA结合


正确答案：E

第3题：

有关煮沸裂解法提取质粒DNA的叙述中，正确的是 ( )

A、该法是一种条件比较剧烈的方法

B、煮沸不能完全灭活核酸内酶A

C、适用于大多数E.coli菌株

D、不适用于表达endA的菌株

E、只能用于小质粒DNA(＜15kb)的小量制备


参考答案：ABCDE

第4题：

下列有关质粒分子生物学的叙述，错误的是（）

  • A、质粒是共价环状的双链DNA分子
  • B、天然质粒一般不含有限制性内切酶的识别序列
  • C、质粒在宿主细胞内能独立于染色体DNA自主复制
  • D、松弛复制型的质粒可用氯霉素扩增
  • E、质粒并非其宿主细胞生长所必需

正确答案:B

第5题：

下列有关限制性核酸内切酶（限制酶）的叙述中错误的是（）

  • A、用限制酶从一个DNA分子中部获取一个目的基因时，4个磷酸二酯键断裂
  • B、限制酶识别序列越短，则该序列在DNA中出现的几率就越小
  • C、—CATG↓—和—G↓GATCC—序列被限制酶切出的黏性末端碱基数相同
  • D、用不同的限制酶处理含目的基因的片段和质粒，也可能形成重组质粒

正确答案:B

第6题：

下列对DNA克隆操作的描述哪一项是错误的A.限制性内切酶在特定的位置上切割质粒和供体DNA分子S

下列对DNA克隆操作的描述哪一项是错误的

A.限制性内切酶在特定的位置上切割质粒和供体DNA分子

B.载体DNA和供体DNA在连接酶的作用下末端相连形成重组DNA

C.除质粒外，入噬菌体可作为重组DNA的载体

D.筛选含重组DNA的细菌通常可根据载体对抗生素的抗性来进行

E.以质粒为载体构建的重组DNA分子引入宿主细胞时需与宿主DNA结合


正确答案：E
DNA克隆是指应用酶学的方法，在体外将各种不同来源的DNA与载体DNA连接成具有自我复制能力的DNA分子，进而通过转化或转染宿主细胞，筛选出含有目的基因的转化子，再进行扩增、提取获得大量同一的DNA分子。故E项错误。

第7题：

下列关于cDNA文库的叙述中错误的是（ ）

A.从特定组织或细胞中提取mRNA
B.将特定细胞的DNA用限制性内切核酸酶切割后，克隆到噬菌体或质粒中
C.用逆转录酶合成mRNA的对应单股DNA
D.用DNA聚合酶，以单股DNA为模板合成双链DNA

答案：B
解析：

第8题：

常采用质粒DNA小量提取的方法是 ( )

A、碱裂解法

B、SDS裂解法

C、煮沸裂解法

D、酚抽提法

E、牙签少量制备法


参考答案：A

第9题：

下列关于基因工程的叙述，错误的是（）

  • A、通常用一种限制性核酸内切酶处理含目的基因的DNA，用另一种处理质粒的DNA
  • B、DNA连接酶和载体是构建重组质粒必需的工具酶
  • C、可用含抗生素的培养基检测大肠杆菌中是否导入了重组质粒
  • D、质粒是广泛存在于细菌细胞质中的一种颗粒状的细胞器

正确答案:A,B,D

第10题：

目前使用较为广泛的质粒DNA小量提取的方法是（）

  • A、牙签少量制备法
  • B、小量一步提取法
  • C、SDS裂解法
  • D、碱裂解法
  • E、煮沸裂解法

正确答案:D

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