微生物学
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相似问题和答案
第1题：
革兰氏染色步骤及原理
正确答案：步骤： 革兰氏染色：挑取可疑菌落 灭菌盐水→取菌→火焰上固定→结晶紫染色1min→水洗→革兰氏碘液染色1min→水洗→95%乙醇染色30S→水洗→沙黄复染液染色1min→水洗→待干→镜检 原理： （1）细胞壁学说：革兰氏阳性菌细胞壁薄，碱性染料容易进入细菌体内，媒染时，加固染色，脱色时不易脱掉；革兰氏阴性菌细胞壁厚，不易染上，脱色时易脱掉，复染时便为粉红色 （2）等电点学说：革兰氏阳性菌等电点低并带负电荷比革兰氏阴性菌多，遇带正电荷碱性染料结合牢固；革兰氏阴性菌带正电，遇酸性染料结合牢固； （3）酶学说：革兰氏阳性菌中含有一种核糖核酸镁盐及多糖复合物能牢固与结晶紫和碘液结合着色，相反革兰氏阴性菌中含有核糖核酸镁盐及多糖复合物少易被酒精脱色而成阴性
第2题：
简述革兰氏染色方法及其机理
正确答案: 革兰氏阳性细菌由于细胞壁较厚、肽聚糖含量较高和其分子交联度较紧密，在用乙醇洗脱时，肽聚糖网孔会因脱水而明显收缩，再加上它基本上不含类脂，故乙醇处理不能在壁上溶出缝隙，因此，结晶紫与碘复合物仍能牢牢阻留在其细胞壁内，使其呈现紫色。反之，革兰氏阴性细菌因其壁薄、肽聚糖含量低和交联松散，故遇乙醇后，肽聚糖网孔不易收缩，加上它的类脂含量高，所以当乙醇把类脂溶解后，在细胞壁上就会出现较大的缝隙，这样，结晶紫与碘的复合物就极易被溶出细胞壁，因此，通过乙醇脱色后，细胞又呈无色。这时，再经番红等红色染料进行复染，就使革兰氏阴性细菌出现红色，而革兰氏阳性菌则仍呈紫色。
第3题：
试述细菌革兰氏染色的步骤、原理和结果?
参考答案：(1)步骤：①先用结晶紫染色，菌体呈紫色;②再加碘液媒染，菌体呈紫色;③然后用乙醇脱色;革兰氏阳性细菌呈紫色，革兰氏阴性细菌无色;④最后用沙黄或番红复染，革兰氏阳性细菌呈紫色，革兰氏阴性细菌呈红色。(2)原理：革兰氏染色结果与细胞壁组成有关，因为革兰氏阳性细菌细胞壁较厚，肽聚糖含量较高，网络结构紧密，含脂量又低，当它被酒精脱色时，引起了细胞壁肽聚糖层网状结构的孔径缩小，从而阻止了不溶性结晶紫-碘复合物的逸出，故菌体呈紫色;可是革兰氏阴性细菌的细胞壁肽聚糖层较薄，含量低，而脂类含量高，当酒精脱色时，脂类物质溶解，细胞壁通透性增大，结晶紫-碘复合物也随之被抽提出来，故革兰氏阴性细菌呈复合液的红色。(3)结果：革兰氏阳性细菌呈紫色，革兰氏阴性细菌呈红色。
第4题：
试以大肠杆菌为例，简述采用革兰氏染色法染色的结果、原理及主要操作步骤。
正确答案: 结果：G-，菌体呈复染液颜色（红色）原理：G-菌细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类物质含量高。当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁通透性增加，致使结晶紫-碘的复合物被抽出，最后被染上了复染液（沙黄或番红）的颜色（红色）。主要操作步骤：涂片：培养一定时间的菌种均匀涂布于载玻片上，干燥、固定；染色：结晶紫初染碘液媒染95％乙醇脱色沙黄或番红复染；油镜观察。
第5题：
革兰氏染色法染色步骤包括（）
正确答案:结晶紫初染、碘液媒染、95%乙醇脱色、稀释复红或沙黄复染
第6题：
试述革兰氏染色的方法。
正确答案:分为初染、媒染、脱色和复染四步。
第7题：
试述革兰氏染色反应的原理和步骤。
正确答案:革兰氏染色反应的原理，细菌细胞壁中肽聚糖厚时，染色不易洗去。
步骤：结晶紫染色——典液处理——酒精褪色——番红染色——紫色为阳性，红色为阴性。
第8题：
说明革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌细胞壁结构的差异,并解释革兰氏染色的机理。
参考答案：(1)革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌细胞壁主要结构成分的差异：革兰氏阳性菌的细胞壁较厚，达15~80mm。其化学成分主要是肽聚糖，站细胞壁总成分的40%~95%，形成15~50层的聚合体。此外，还有磷壁酸、多糖和蛋白质等。革兰氏阴性菌细胞壁较薄，其结构和成分较复杂，由外膜与周质间隙组成，无磷壁酸。外膜由脂多糖、磷脂、外膜蛋白质和脂蛋白等组成，脂多糖位于最外层，其中的类脂A是革兰氏阴性菌内毒素的主要成分。周质间隙是革兰氏阴性菌细胞壁外膜与细胞膜之间狭窄的空隙，其中含有一薄层肽聚糖以及蛋白酶、核酸酶、肽聚糖合成酶、结合蛋白和受体蛋白等多种周质蛋白。(2)革兰氏染色机理：1.革兰氏染色法，(1)草酸铵结晶紫染色：在已干燥、固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染色液，经1~2min，水洗。这时细菌都染成紫色。(2)碘溶液助染：加碘溶液于抹片上，作用1~3min,水洗。这时细菌都呈更深的紫色。(3)95%酒精脱色：加95%酒精于抹片上，可见标本中一些紫色染料脱出、直至紫色染料不在脱出(时间因细菌抹片厚薄不同而异，大约30s至1min)，水洗。这时有的细菌原染上的紫色被脱去，呈无色;有的细菌原染上的紫色脱不了，仍保持紫色。(4)复染：加碱性复红液(或沙黄液或稀释石碳酸复红液)复染10~30s，水洗。这时已脱色的细菌复染成红色，未脱色的细菌呈蓝紫色。(5)油镜观察：将染好的片用滤纸盖上吸干或烘干，油镜观察，呈蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌，呈红色的为革兰氏阴性菌。2.革兰氏染色原理：G—菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经石炭酸复红或沙黄复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。
第9题：
请简述革兰氏染色的机理。
正确答案: （1）G+、G-主要由其CW化学成分的差异而引起对乙醇的通透性，抗脱色能力的差异。主要有肽聚糖的厚度和结构所决定。
（2）G+的CW：肽聚糖层厚，脂质含量低。乙醇脱色时CW脱水，孔径减少，透性降低，不易脱色，呈初染得蓝紫色。
（3）G-的CW：肽聚糖层薄，脂质含量高。乙醇脱色时，类脂被乙醇溶解，透性升高，细胞被复染显红色。
第10题：
简述革兰氏染色机理？
正确答案: 通过结晶紫液初染和碘液媒染后，在细菌的细胞膜内可形成不溶于水的结晶紫与碘的复合物。G+细菌由于其细胞壁较厚，肽聚糖网层次多和铰链致密，故遇脱色溶剂乙醇处理时，因失去水而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇的处理不会溶出缝隙，因此能把结晶紫与碘的复合物牢牢留在壁内，使其保持紫色。
反之，G-细菌因其细胞壁薄，外膜层类脂含量高，肽聚糖层薄和铰链度差，遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，这时薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘的复合物的溶出，因此细胞褪成无色，这时再经红色染料复染，就使G-细菌呈现红色，而G+细菌仍保留最初的紫色。