工学
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相似问题和答案
第1题：
基因克隆过程中，获得目的基因的途径有哪些？
正确答案: （1）从基因组文库（genomic library）中获得；
（2）从cDNA文库中获得；
（3）PCR扩增特定基因；
（4）人工合成。
第2题：
目的基因克隆的基本方法有哪些？
正确答案: （1）直接从染色体DNA中分离：
仅适用于原核生物、叶绿体和线粒体基因的分离，较少采用。
（2）人工合成：
根据已知多肽链的氨基酸顺序，利用遗传密码表推定其核苷酸顺序再进行人工合成。适应于编码小分子多肽的基因。
（3）从mRNA合成cDNA：
采用一定的方法钓取特定基因的mRNA，再通过逆转录酶催化合成其互补DNA（cDNA），除去RNA链后，再用DNA聚合酶合成其互补DNA链，从而得到双链DNA。这一方法通常可得到可表达的完整基因。
（4）利用PCR合成：
如已知目的基因两端的序列，则可采用聚合酶链反应（polymerase chainreaction，PCR）技术，在体外合成目的基因。
（5）从基因文库中筛选：
首先建立基因组或cDNA文库，利用探针从文库中筛选目的克隆。
第3题：
重组DNA技术的基本步骤包括
A、选择载体和获取目的基因
B、目的基因与载体酶切后连接
C、重组DNA导入受体细胞
D、筛选阳性克隆
E、分、切、接、转、筛
参考答案：ABCDE
第4题：
目标基因克隆的主要方法有哪些？分析其特点及其适用范围。
正确答案: ①PCR扩增。
优点：简便快速，高效，数kb单基因克隆。
缺点：DNA聚合酶活性和保真性限制。（94℃变性→55℃退火→72℃延伸→94℃变性……）
②文库筛选。
优点：长片段，无碱基错误，位置序列基因克隆。
缺点：繁琐，过程复杂，耗时，昂贵。
③化学合成：简便，准确，已知序列基因克隆，引物合成。
缺点：受合成仪性能限制，长度很短。
第5题：
试述淋巴细胞杂交瘤技术的基本原理？其基本技术步骤要点？单克隆抗体的有哪些应用？
正确答案:（1）杂交瘤技术的基本原理：
①两类细胞
骨髓瘤细胞
可以在体外培养生长，而且比正常细胞生长繁殖快；其可以从患骨髓瘤的小鼠体内获得，不会产生抗体。
脾B淋巴细胞
经抗原致敏分化后会分泌相应单一的均匀的特异性抗体。
②将上两类各具功能的细胞融合在一起，培养成既能产生单一抗体，又能在体外快速生长的杂交瘤细胞。
（2）其基本技术步骤要点：
B.淋巴细胞的制备、骨髓瘤细胞的制备、选择培养基、细胞融合、杂交瘤细胞的选育、检测抗体、杂交瘤细胞的克隆、单克隆抗体生产。
（3）单克隆抗体的有哪些应用：
①作为亲合层析的配体
②作为生物治疗的导向武器
③作为免疫抑制剂
④在免疫学基础研究方面
第6题：
链霉菌基因克隆的基本步骤有哪些？
正确答案: 链霉菌基因克隆的基本步骤：
（1）制备供体DNA片段；
（2）制备载体DNA；
（3）连接载体和供体DNA片段；
（4）将受体菌制成原生质体；
（5）将连接了供体DNA片段的载体对受体菌的原生质体进行转化；
（6）让原生质体再生细胞壁，随后对转化的细胞进行选择。
第7题：
什么是细胞核移植技术？克隆的基本方法有哪些？
正确答案: 核移植技术——又称细胞质工程、核质杂交，是利用显微操作技术将称为供体的一种动物细胞的细胞核移植到称为受体的同种或异种的另一种细胞中，或者将两个细胞的细胞核（或细胞质）进行交换，形成核质杂种，并使受体细胞得以继续分裂和发育的方法。
（1）胚胎干细胞核移植；
（2）胚胎细胞核移植；
（3）胎儿成纤维细胞核移植；
（4）体细胞核移植
第8题：
PCR克隆目的基因的基本程序是什么？
正确答案:由TaqDNA聚合酶扩增的PCR产物中，其3’末端总是会带有一个非模板依赖型的突出碱基，而且这个碱基几乎总是A，因为TaqDNA聚合酶对dATP具有优先聚合活性。由于该突出碱基的存在，克隆时即可以采取TdT末端加同聚尾的方法与载体拼接，也可以使用专门的T载体克隆。
第9题：
概述基因克隆的基本步骤。
正确答案: 基因克隆的基本步骤有：
①用相互配套的1～2种限制酶切割含目的基因的DNA和载体DNA（切）；
②连接目的基因和载体DNA得到重组载体（接）；
③将重组载体导入宿主细胞（转），若使用的是质粒载体，称转化，噬菌体载体称转导，病毒载体称转染；
④将经过转化（或转导，转染）的细菌或细胞稀释，在加有选择性培养基的平皿培养基或细胞培养板上培养，选择含目的基因的阳性克隆，并用其它方法进一步鉴定（筛）；
⑤扩大培养选出的阳性克隆（扩）。随后可分离目的基因，或在一定的条件下表达目的基因。
第10题：
酶基因克隆的主要操作步骤包括（）
- A、目的酶基因的获取
- B、构建重组表达载体
- C、重组载体导入受体细胞
- D、加入诱导剂使目的酶表达
- E、对重组子进行筛选与鉴定
正确答案:A,B,C,E