工学

问答题试比较常规聚丙稀酰胺凝胶电泳与SDSPAGE的分离原理

题目
问答题
试比较常规聚丙稀酰胺凝胶电泳与SDSPAGE的分离原理
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第1题:

常用于临床血清蛋白分离的常规方法为

A.醋酸纤维素薄膜电泳
B.琼脂糖凝胶电泳
C.聚丙烯酰胺凝胶电泳
D.等电聚焦电泳
E.园盘电泳

答案:B
解析:
常用于临床血清蛋白分离的常规方法为琼脂糖凝胶电泳。

第2题:

简述SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理。


正确答案:原理:SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的,因此在进行电泳时,蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小。

第3题:

十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳中,丙烯酰胺浓度越大,线性分离范围

A、变大

B、不变

C、越大

D、越小

E、丙烯酰胺浓度与线性分离范围无关


参考答案:D

第4题:

结合SDSPAGE电泳的分离原理说明未知蛋白质分子量的测定方法。


正确答案: 1.SDS-PAGE的原理:SDS是一种阴离子去污剂,作为变性剂和助溶性试剂,能断裂分子内和分子间的氢键,使分子去折叠,破坏蛋白质分子的二级、三级结构;而强还原剂,如二硫苏糖醇、β-巯基乙醇能使半胱氨酸残基之间的二硫键断裂。因此,在样品和凝胶中加入SDS和还原剂后,蛋白质分子被解聚为组成它们的多肽链,解聚后的氨基酸侧链与SDS结合后,形成带负电的蛋白质-SDS胶束,所带电荷远远超过了蛋白质原有的电荷量,消除了不同分子间的电荷差异;同时,蛋白质-SDS聚合体的形状也基本相同,这就消除了在电泳过程中分子形状对迁移率的影响。
2.未知蛋白质分子量的测定:基于上述SDS-PAGE的原理介绍,我们可以利用SDS-PAGE电泳进行未知蛋白质的分子量测定;以不同分子量的标准蛋白进行SDS-PAGE电泳得到不同标准蛋白的电泳迁移率,制作标准校正曲线,然后对未知蛋白在相同条件下进行SDS-PAGE电泳,测定迁移率,从标准曲线得到相应的分子量;

第5题:

聚丙烯酰胺凝胶电泳主要用于()的分离


正确答案:蛋白质

第6题:

十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳中,丙烯酰胺浓度越大,线性分离范围

A.变大
B.不变
C.越大
D.越小
E.丙烯酰胺浓度与线性分离范围无关

答案:D
解析:

第7题:

试述聚丙烯酰胺凝胶电泳原理。


正确答案: 利用聚丙烯酰胺凝胶作电泳的支持物来分离蛋白质、核酸等大分子化合物的方法称为聚丙烯酰胺凝胶电泳法。聚丙烯酰胺单体(Acr)与交联剂甲叉双丙烯酰胺(Bis)在催化剂过硫酸铵或维生素B2作用下聚合交联而形成三维网状结构凝胶。在催化过程中同时加入四甲基乙二胺作为加速剂。聚丙烯酰胺凝胶不但可以作为电泳支持物,同时具有分子筛的特点,其分子筛效应的孔径可由不同浓度的凝胶进行控制,因而其分辨率和敏感性都很高。

第8题:

聚丙烯酰胺凝胶电泳的分离原理除包括浓缩效应、电荷效应外,还包括

A、重力效应

B、电渗效应

C、扩散效应

D、分子筛效应

E、渗透压效应


参考答案:D

第9题:

试比较常规聚丙稀酰胺凝胶电泳与SDSPAGE的分离原理


正确答案: 由于聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE.是多孔介质,不仅能防止对流,把扩散减少到最低;而且其孔径大小与生物大分子具有相似的数量级,能主动参与生物分子的分离,具有分子筛效应。因此,在使用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行蛋白质分离时,在电泳过程中不仅取决于蛋白质的电荷密度,还取决于蛋白质的尺寸和形状。
SDS是一种阴离子去污剂,作为变性剂和助溶性试剂,能断裂分子内和分子间的氢键,使分子去折叠,破坏蛋白质分子的二级、三级结构;而强还原剂,如二硫苏糖醇、β-巯基乙醇能使半胱氨酸残基之间的二硫键断裂。
因此,在样品和凝胶中加入SDS和还原剂后,蛋白质分子被解聚为组成它们的多肽链,解聚后的氨基酸侧链与SDS结合后,形成带负电的蛋白质-SDS胶束,所带电荷远远超过了蛋白质原有的电荷量,消除了不同分子间的电荷差异;同时,蛋白质-SDS聚合体的形状也基本相同,这就消除了在电泳过程中分子形状对迁移率的影响。

第10题:

试比较常规聚丙稀酰胺凝胶电泳与SDS,PAGE的分离原理?


正确答案: 常规聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS-PAGE均为凝胶电泳的一种。聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质是依据其电荷(性质、荷电量)、分子形状和分子大小(分子量)差异实现分离的;SDS-PAGE由于加入了SDS和强还原剂(DTT等),破坏了蛋白质分子的高级(二级、三级、四级)结构,并与蛋白质形成荷大量负电荷的聚合物,消除了不同蛋白质分子电荷及分子形状差异,而仅将分子量差异作为分离依据,常用于测定未知蛋白质的亚基分子量。

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