理学
问答题质粒不稳定常见的是分裂不稳定，试述提高质粒稳定性的方法。
题目
问答题
质粒不稳定常见的是分裂不稳定，试述提高质粒稳定性的方法。
参考答案和解析
正确答案：
1、选择适当宿主，如重组质粒在大肠杆菌中比较稳定。
2、培养基加入选择性压力如抗生素，抑制质粒丢失菌的生长。
3、采用两阶段培养法。在培养的第一阶段以增加菌体的生长达到一定密度为目的，外源基因不表达，从而使工程菌与质粒丢失菌的比生长速率的差别减小，增加了质粒的稳定性；第二阶段再诱导外源基因的表达。
4、控制培养条件如温度、培养基组分等，使工程菌体现出有优势的比生长速率。间歇供氧和改变稀释速率可以提高质粒的稳定性。
5、在质粒构建时插入一段能改良宿主细胞生长速率的特殊DNA片段，能起到稳定质粒的效果。
6、剔除质粒上不需要的DNA部分，选取不含可转移因子的质粒。
7、固定化重组菌以提高工程菌的稳定性。
2、培养基加入选择性压力如抗生素，抑制质粒丢失菌的生长。
3、采用两阶段培养法。在培养的第一阶段以增加菌体的生长达到一定密度为目的，外源基因不表达，从而使工程菌与质粒丢失菌的比生长速率的差别减小，增加了质粒的稳定性；第二阶段再诱导外源基因的表达。
4、控制培养条件如温度、培养基组分等，使工程菌体现出有优势的比生长速率。间歇供氧和改变稀释速率可以提高质粒的稳定性。
5、在质粒构建时插入一段能改良宿主细胞生长速率的特殊DNA片段，能起到稳定质粒的效果。
6、剔除质粒上不需要的DNA部分，选取不含可转移因子的质粒。
7、固定化重组菌以提高工程菌的稳定性。
解析：
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相似问题和答案
第1题：
与性菌毛形成有关的质粒是A.F质粒B.R质粒C.Col质粒D.vi质粒
与性菌毛形成有关的质粒是
A.F质粒
B.R质粒
C.Col质粒
D.vi质粒
E.K质粒
正确答案：A
有F质粒的细菌可形成性菌毛。
有F质粒的细菌可形成性菌毛。
第2题：
试述质粒的类型有哪些？
正确答案: 根据细菌染色体对质粒复制的控制程度是否严格可将质粒分为：严紧型质粒和松弛型质粒。
按转移方式分为：接合型质粒、可移动型质粒、自传递型质粒。
按质粒大小分为：小型质粒、大型质粒。
按质粒的宿主范围分为：窄宿主谱型质粒、广宿主谱型质粒。
按质粒的功能分为：F质粒、R质粒、Col质粒。
第3题：
编码细菌毒力的质粒是
A、R质粒
B、Col质粒
C、F质粒
D、K质粒
E、Vi质粒
参考答案：E
第4题：
为了提高基因工程菌的质粒稳定性，可采用哪些主要方法？
正确答案:为了提高基因工程菌的质粒稳定性，可采取：
（1）选择合适的宿主菌；
（2）选择合适的载体；
（3）选择压力；
（4）分阶段控制培养；
（5）控制培养条件；
（6）固定化技术。
第5题：
简述质粒不稳定现象。
正确答案: 1.由于某种环境或生理学上的原因，质粒会从某些宿主细胞中丢失，丢失率因环境、宿主、质粒的结构而有不同。
2.有时候重组质粒上一部分片段脱落，表现为质粒变小或某些遗传信息发生变化甚至丧失也会导致质粒不稳定。
第6题：
试述举2种质粒DNA提取的方法及应用。
正确答案: 质粒DNA提取的方法包括碱裂解法、煮沸裂解法和SDS裂解法。
碱裂解法：在NaOH存在的强碱性（pH12.0～14.0）的条件下，用强阳离子去垢剂SDS破坏细胞壁和裂解细胞，并使宿主细胞的蛋白质与染色体DNA发生变性，释放出质粒DNA。它是一种适用范围很广的方法，能从所有的大肠杆菌（E.coli）菌株中分离出质粒DNA，制备量可大可小。
煮沸裂解法：是将细菌悬浮于含Triton X-100和溶菌酶的缓冲液中，Triton X-100和溶菌酶能破坏细胞壁，再用沸水浴裂解细胞，使宿主细胞的蛋白质与染色体DNA发生变性。对CCC质粒DNA因结构紧密不会解链，当温度下降后，CCC质粒DNA可重新回复其超螺旋结构，通过离心去除变性的蛋白质和染色体DNA，然后回收上清液中的质粒DNA。本法只能用于小质粒DNA（小于15kb）的小量或大量制备，适用于大多数从大肠杆菌（E.coli）菌株中分离出质粒DNA。
S.DS裂解法：它是将细菌悬浮于等渗的蔗糖溶液中，用溶菌酶和EDTA处理以破坏细胞壁，再用SDS裂解去壁细菌，从而温和地释放出质粒DNA到等渗溶液中，然后用酚/氯仿抽提。适用于大质粒DNA的提取。
第7题：
基因工程菌在传代过程中经常出现质粒不稳定性的现象，质粒不稳定分为（）和（）；基因工程菌的不稳定性至少维持（）代以上。
正确答案:分裂不稳定性；结构不稳定性；25
第8题：
质粒的分裂不稳定。
参考答案：通常将质粒不稳定性分为两类:一类是结构不稳定性,也就是质粒由于碱基突变、缺失、插入等引起的遗传信息变化;另一类是分离不稳定性,指在细胞分裂过程中质粒不能分配到子代细胞中,从而使部分子代细胞不带质粒(即P-细胞)。在连续和分批培养过程中均能观察到此两类现象发生。一般情况下具有质粒的细胞(即P+细胞)需要合成较多的DNA、RNA和蛋白质,因此其比生长速率低于P-细胞,从而P-细胞一旦形成能较快速地生长繁殖并占据培养物中的大多数。
第9题：
简述质粒不稳定的原因及提高稳定性的方法.
正确答案: 其主要与两个因素有关：
一是含质粒菌产生不含质粒子代菌的频率；
二是这两种菌的比生长速率差异的大小。提高质粒稳定性的方法：工程菌的培养一般采用分成两阶段培养法来提高质粒的稳定性。在培养的第一阶段以增加菌体的生长达到一定密度为目的，外源基因不表达，从而使工程菌与质粒丢失菌的比生长速率的差异减小，增加了质粒的稳定性；第二阶段再诱导外源基因的表达。可以在培养基中加入选择性压力如抗生素等，以抑制质粒丢失菌的生长。控制适当的培养条件也能使工程菌具有优势的比生长速率，可调控的培养条件有温度、PH、培养基组分和溶解氧等。
第10题：
基因工程菌中重组质粒的丢失机制是（）
- A、重组质粒渗透至细胞外
- B、重组质粒被细胞内核酸酶降解
- C、重组质粒在细胞分裂时不均匀分配
- D、重组质粒杀死受体细胞
- E、重组质粒刺激受体细胞提高其通透性
正确答案:C