医学高级专业技术资格答辩
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相似问题和答案
第1题：
简述单克隆抗体的应用。
正确答案:单克隆抗体有许多特点，使得在医学、药学、生物学等领域迅速发展并广泛应用。
1.作为抗癌药物的导向载体，有生物"导弹"之称。
2.作为药物，用于诊断与防治。
3.检定药品。
4.作为受体探针，受体（神经递质、激素受体等）具有一定的抗原性。
5.分析大分子如膜抗原、抗体及酶类分子结构、功能及分布。
第2题：
简述单克隆抗体的主要技术路线。
正确答案:单克隆抗体的制备：①动物免疫与亲本细胞的选择；②细胞融合：淋巴细胞杂交瘤的制备；③杂交瘤细胞的筛选：有限稀释法等；④单克隆抗体的制备和冻存；⑤单克隆抗体的纯化
亲本细胞的选择：①骨髓瘤细胞：一般不分泌抗体，能在体外无限繁殖和连续继代培养，且为HGPRT－（次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶）或TK－（胸腺嘧啶核苷激酶）缺陷。多用BALB/C小鼠的骨髓瘤细胞。②淋巴细胞：经过免疫处理的淋巴细胞，多用大鼠或小鼠。③免疫方法：对细胞或微生物抗原可直接注射如小鼠体内，可溶性蛋白抗原可与等量的福氏完全佐剂混合乳化后，注入到动物体内。
细胞融合：将免疫脾细胞和小鼠骨髓细胞以2：1或10：1的比例混匀于50ml锥形离心管内，1200rpm离心；10分钟，尽量吸净上清液，用手指轻击管壁，使管底沉淀的细胞铺展成薄层，在室温条件下边轻轻振摇离心管边在60秒钟内逐滴加入50%的PEG0.5ml，随后静置90秒，再于5分钟内边振摇边逐滴加入5－10ml不含血清的培液或盐水缓冲液，以终止PEG的作用，再静置10分钟。
HAT培养基筛选杂交瘤细胞：细胞团块分散后，加HAT溶液，即可加入有饲养细胞的96孔塑料培养板内每孔0.1ml，用HAT选择性培养时隔4－5天换液，8-10天后可以选择检测。
HAT选择系统：HAT是含一定浓度次黄嘌呤（H）、氨基喋呤A.及胸腺嘧啶核苷（T）的一种选择性培养基，其中三种成分与细胞DNA合成有关。
第3题：
简述单克隆抗体的制备原理。
正确答案：B淋巴细胞在抗原的刺激下，能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力。B细胞的这种能力和量是有限的，不可能持续分化增殖下去，因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的。将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，再进一步克隆化，这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力，又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力，将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的高效价、单一的特异性抗体。这种技术即称为单克隆抗体技术。
第4题：
简述单克隆抗体在医学上的应用。
正确答案: （1）诊断试剂：①蛋白质的提纯。②小分子抗体的应用。③抗体融合蛋白的应用。④双特异抗体的应用。（2）治疗：单克隆抗体用于肿瘤的靶向治疗，是一种全新的肿瘤生物治疗模式，有广阔的发展前景。
第5题：
试述制备单克隆抗体的原理是什么？用到的动物细胞工程技术手段有哪几种？单克隆抗体的特点有哪些？
正确答案:单克隆抗体的原理：要制备单克隆抗体需先获得能合成专一性抗体的单克隆B淋巴细胞，但这种B淋巴细胞不能在体外生长。而实验发现骨髓瘤细胞可在体外生长繁殖，应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与免疫的淋巴细胞二者合二为一，得到杂种的骨髓瘤细胞。这种杂种细胞继承两种亲代细胞的特性，它既具有B淋巴细胞合成专一抗体的特性，也有骨髓瘤细胞能在体外培养增殖永存的特性，用这种来源于单个融合细胞培养增殖的细胞群，可制备一种抗原决定簇的特异单克隆抗体。
手段：（1）灌注悬浮培养：连续灌注新的培养基，同时连续排出旧的培养液了，使细胞在一个相对稳定的环境中生长和繁殖，可提高细胞密度10倍以上
（2）贴壁细胞培养：由于大部分动物细胞无细胞壁，进行细胞培养时必须附在固体或半固体表面上培养，在固体载体表面上生长，并扩成一单层，称为单层培养法
（3）固定化细胞培养：采用载体使整个细胞固定化
单克隆抗体的特点：
（1）单克隆抗体是针对单一抗原决定的化学结构完全相同的单一抗体，其特异性强，与其对应抗原的亲和力高度均一
（2）制备时无需将抗原纯化，适于由未纯化的抗原大量制备。
（3）杂种瘤细胞株可冷冻于液氮中长期保存，所以单克隆抗体可以重复稳定的制备，不会因批号的不同而产生差异，只要使用来自同样杂交瘤的单克隆抗体，就能够以同一标准比较各研究室的数据。
第6题：
请回答下列有关单克隆抗体的问题：单克隆抗体与普通血清抗体相比较，具有（）的特点。其诱导融合的常用方法（）、（）、（）在单克隆抗体的制备过程中，运用的技术手段是（）、（）。
正确答案:特异强、灵敏度高；PEG；灭活病毒；离心电激等；细胞培养；细胞融合
第7题：
简述单克隆抗体的生产过程
正确答案: 首先取得抗原（包括细菌、病毒或某种纯的蛋白）注射到小鼠体内，大约注射四次，使小鼠免疫并产生相应的抗体。取小鼠的血清与抗原作用，确认产生抗原—抗体凝集反应。取出免疫鼠的脾脏制成脾细胞悬浮液，与鼠骨髓瘤细胞混合，加入聚乙二醇（PEG4000）形成融合细胞杂交瘤。它具有分泌抗体又能迅速生长的特性，叫单克隆抗体杂交株。
第8题：
单克隆抗体技术是植物细胞工程技术。（）
正确答案:错误
第9题：
简述人单克隆抗体的研究进展。
正确答案:随着抗体工程技术的发展，可使所有的单克隆抗体人源化，并可降低免疫排斥反应性。
1.噬菌体表达技术：是利用噬菌体表面表达人的功能性抗体片断的技术，可以加快抗体筛选速度。
2.转基因动物在用异体抗原免疫转基因动物时，可得到完全人源化的单克隆抗体，所需技术比噬菌体表达技术简单。今后的开发方向是细胞表面受体、分泌蛋白质、特定表面抗原等。
第10题：
试述单克隆抗体技术及杂交瘤细胞的获得方法
正确答案: 利用B细胞产生特异性抗体的能力与骨髓瘤细胞的无限生长能力，将两者融合形成杂交瘤细胞，对杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内可获得大量的高效价、单一的特异性抗体，该技术即单克隆抗体技术。杂交瘤细胞的获得方法是用缺乏次黄嘌呤磷酸核糖转化酶或胸腺嘧啶核苷酸酶的瘤细胞变异株与脾脏的B细胞融合，采用HAT选择性培养基［培养基中加次黄嘌呤（H），氨基蝶呤A.及胸腺嘧啶核苷（T）］培养筛选。
在这种培养基中，由于变异的瘤细胞不具有次黄嘌呤磷酸核糖转化酶或胸腺嘧啶核苷激酶，不能利用培养基中的次黄嘌呤或胸腺嘧啶核苷而合成DNA，只能利用谷酰胺与尿核苷酸单磷酸合成DNA，这一途径又被氨基蝶呤所阻断，所以未融合的瘤细胞不可避免地死亡。融合的杂交瘤细胞由于脾淋巴细胞具有次黄嘌呤磷酸核糖转化酶，可以通过次黄嘌呤合成DNA，克服氨基蝶呤的阻断，因此杂交瘤细胞大量繁殖而被筛选出来。B淋巴细胞在一般培养基中不能长期生长，一般于2周内均死亡。